Оставьте ссылку на эту страницу в соцсетях:

Поиск по базе документов:

 

Утверждаю

Руководитель Федеральной

службы по надзору в сфере

защиты прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

6 августа 2007 года

 

Дата введения:

1 октября 2007 года

 

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК

ПЛЕСНЕВОГО ГРИБА PENICILLIUM CANESCENS PLPH33 - ПРОДУЦЕНТА

ПЕКТИНЛИАЗЫ И ФИТАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.2.2234-07

 

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 марта 2007 г. N 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 6 августа 2007 г.

3. Разработаны ГОУ ВПО "Российский государственный медицинский университет".

4. Введены в действие с 1 октября 2007 г.

5. Введены впервые.

 

1. Общие положения и область применения

 

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium canescens PlPh33 - продуцента пектинлиазы и фитазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".

Методические указания предназначены для применения в учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Методические указания одобрены и рекомендованы секцией "Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены окружающей среды".

 

2. Биологическая характеристика Penicillium canescens

PlPh33 и его гигиенический норматив

 

Штамм мицелиального гриба Penicillium canescens PlPh33 является продуцентом пектинлиазы и фитазы. Получен из штамма Penicillium canescens ВКПМ F-178 путем селекции. Депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под номером ВКМ F-3867D.

Растет на агаризованных средах (среда Чапека с дрожжевым автолизатом, сусло-агар, Мальц-агар, глюкозо-картофельный агар) при температуре 25 - 28 °C в течение 5 - 7 сут., pH 5,0 - 6,0. При температуре 5 и 37 °C роста колоний не наблюдается.

На среде Чапека с дрожжевым автолизатом и сусло-агаре колонии достигают максимального диаметра 5 - 6 см. Колонии радиально складчатые, средней плотности, ростовая зона плотная. Мицелий белый, конидиальная зона голубовато-серебристая, конидиогенез обильный. Обратная сторона палевая, буроватая, со временем темно-коричневая.

При микроскопическом исследовании конидиеносцы двухъярусные, терминальные, фуркатные, шероховатые, длиной 150 мкм, шириной 3 - 4 мкм. Метулы шероховатые, размером 10 - 18 x 2,5 - 3,5 мкм, фиалиды ампулиформные, размером 7 - 8 x 2 - 3 мкм, конидии чаще округлые, гладкие, размером 2,2 - 3,0 x 2,0 - 3,0 мкм.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2000 кл./куб. м, пометка А.

 

3. Пределы измерений

 

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток плесневого гриба в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95.

 

4. Метод измерений

 

Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность агаризованной среды и подсчете выросших колоний по типичным культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим признакам на 3-и сут.

 

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

 

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

 

5.1. Средства измерений, вспомогательные

устройства, материалы

 

Импактор микробиологический "Флора-100"           ТУ 9443-001-05031637-2002

Прибор для бактериологического анализа воздуха,

модель 818 (щелевой прибор Кротова)               ТУ 64-12791-77

Прибор MAS - 100 ECO фирмы Merk (Германия)

для отбора проб воздуха

Термостаты электрические суховоздушные

или водяные

Автоклав электрический                            ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Ареометр-сахарометр с диапазоном измерений

0 - 10% с ценой деления 0,1%                      ГОСТ 18481-87

Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной

системой типа "Биолам" Л-211

Лупа с увеличением 10x                            ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные

стеклянные, диаметром 90 мм                       ГОСТ 23932-90

Пробирки бактериологические П1 и П2

вместимостью 15 и 20 мл                           ГОСТ 25336-82

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                    ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                    ГОСТ 1770-74

Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл        ГОСТ 1770-74

Секундомер                                        ГОСТ 9586-75

Барометр                                          ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                 ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                 ГОСТ 25556-81

 

5.2. Реактивы, растворы

 

Агар микробиологический                           ГОСТ 17206-84

Экстракт солодовый                                ГОСТ 418-84

Пектин                                            ГОСТ Р 51806-2001

Вода дистиллированная                             ГОСТ 6709-72

Спирт этиловый ректификат                         ГОСТ 5962-67

Кислота молочная пищевая (для подкисления

среды и подавления посторонней

бактериальной флоры)                              ГОСТ 490-79

Среда сусло-агар: солодовое сусло 7° Б - 98%, агар-агар - 2%, pH среды - 4,5 - 5,0, режим стерилизации: Р - 0,8 кгс/кв. см, 40 мин. Для приготовления солодового сусла 7° Б солодовый экстракт растворяют в дистиллированной воде до 7% содержания сахара с помощью ареометра.

 

6. Требования безопасности

 

При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают требования:

- санитарных правил СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами";

- правил техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

- правил электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора;

- руководства "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980);

- "Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

 

7. Требования к квалификации операторов

 

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

 

8. Условия измерений

 

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

 

9. Проведение измерения

 

9.1. Условия отбора проб воздуха

 

Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи пробоотборника со скоростью 10 л/мин. на поверхность агаризованной среды. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.

Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

 

9.2. Выполнение анализа

 

Метод предполагает учет количества типичных колоний, выросших на 2 - 3-и сут. после посева проб воздуха по культурально-морфологическим признакам. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50 - 60 °C, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (для подкисления среды и подавления посторонней бактериальной микрофлоры, pH 5,0 - 6,0), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.

Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °C, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 28 °C. Через 3 - 4 сут. проводят подсчет выросших типичных по морфологическим признакам колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

При микробиологическом анализе воздуха производственных помещений дополнительным функциональным методом является отбор пробы воздуха на чашки Петри с агаризованной средой. После отбора проб чашки покрывают слоем 2%-го водного пектина толщиной 0,5 см. Затем инкубируют в термостате при 28 °C в течение 48 - 72 ч и подсчитывают количество зон осветления и разложения пектина вокруг выросших колоний.

Ростовые свойства всех используемых питательных сред должны быть проверены в соответствии с "Требованиями к ростовым свойствам питательных сред" (Государственная фармакопея СССР, изд. XI, вып. 2. С. 208), что позволит более полно оценить пределы ошибки метода. Для этого эталонный музейный штамм-продуцент высевается на 2 - 3 чашки каждой используемой среды.

 

10. Вычисление результатов измерения

 

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха проводят по формуле:

 

                                   N x 1000

                               X = --------,

                                      V

 

где:

X - концентрация клеток продуцента в воздухе, кл./куб. м;

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;

1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

 

11. Оформление результатов измерений

 

Результаты измерений оформляют протоколом по приведенной форме.

 

Протокол N ___

количественного микробиологического анализа

штамма-продуцента P. canescens PlPh33

в воздухе рабочей зоны

 

    1. Дата проведения анализа ____________________________________________

    2. Место отбора пробы _________________________________________________

    3. Название лаборатории _______________________________________________

    4. Юридический адрес организации ______________________________________

 

Результаты микробиологического анализа

 

 Шифр или N пробы

Определяемый микроорганизм

 Концентрация, кл./куб. м

 

 

 

 

Ответственный исполнитель:

Научный руководитель:

 

Список литературы

 

1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

2. ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ. "Методики выполнения измерений".

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. М., 1977. 7 с.

5. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. М.: МГУ. С. 122.

 

 



Мегабиблиотека по охране труда и технике безопасности. // Некоммерческий проект для инженеров по охране труда. //

Рейтинг@Mail.ru Яндекс цитирования

Copyright © www.УЦОТ.рф, 2012 - 2018