Оставьте ссылку на эту страницу в соцсетях:

Поиск по базе документов:

 

Утверждаю

И.о. Председателя

Госкомсанэпиднадзора России -

Заместитель Главного

государственного санитарного

врача Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

8 июня 1996 года

 

Дата введения -

с момента утверждения

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ

СТРЕПТОДЕКАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.256-96

 

1. Методические указания по измерению концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 30) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

2. Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны утверждены и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.

3. Введены впервые.

4. Методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТа 12.1.016-79. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ" и ГОСТа Р 1.5-92, п. 7.3.

Методические указания одобрены на совместном заседании группы Главного эксперта Федеральной комиссии по санитарно-гигиеническому нормированию "Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции "Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

Ответственные исполнители: Г.А. Дьякова, С.И. Муравьева.

Исполнители: Г.А. Дьякова, Н.С. Горячев, Л.Г. Макеева, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.В. Грыжина, Е.Н. Грицун.

 

Стрептодеказа

М. м. 70000 - 130000.

Структурная формула (не приводится).

    n  -  100  мол.  %  звеньев  полиглюкина  (ПГ);  Y - 24 мол. %

окисленных  звеньев  ПГ;  р  -  мол. %  NH  -групп  стрептокиназы,

                                         2

модифицированной ПГ.

Белый или с желтоватым оттенком лиофилизированный порошок или пористая масса, уплотненная в таблетку. Легко растворим в воде, растворе натрия хлорида 0,9% изотонического (ГФ, х, стр. 756).

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Проявляет сенсибилизирующие и аллергические свойства.

ПДК в воздухе - 1 мг/куб. м.

 

Характеристика метода

 

Методика основана на использовании высокоспецифических антител к стрептодеказе, проведении реакции антиген-антитело с антителами, меченными ферментом-маркером пероксидазой, и спектрофотометрическом тестировании активности пероксидазы при длине волны 492 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения концентрации в анализируемом растворе - 0,03 мкг.

Диапазон изменяемых концентраций - от 0,12 до 1,2 мг/куб. м.

Нижний предел измерения в воздухе - 0,12 мг/куб. м (при отборе 50 л воздуха).

Измерению не мешают белки (бычий сывороточный альбумин, яичный альбумин), ферменты (липаза Pen. solitum, L - аспарагиназа Е. coli).

Суммарная погрешность не превышает +/- 25%.

Время выполнения измерений, включая отбор проб - 4 ч.

 

Приборы, аппаратура, посуда

 

Аспирационное устройство

Весы лабораторные 2-го класса

точности, тип ВЛР-200: погрешность

взвешивания по шкале +/- 0,15 мг                   ГОСТ 24104-88

Иономер универсальный ЭВ-74:

погрешность измерений +/- 0,005                    ГОСТ 22261-82

Дозаторы пипеточные                                ТУ 64-1-3329-81

Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-500-2,

2-1000-2, 2-го класса точности                     ГОСТ 1770-74

Пипетки 6-2-5, 6-5-10                              ГОСТ 20292-74

Планшеты для иммуноферментного анализа             ТУ 64-2-278-78

Считыватель АКИ-Ц-0,1                              ТУ 64-16-17-89

Стаканы химические вместимостью 0,05, 0,15,

0,2 и 1 л                                          ГОСТ 19980-80

Термостат суховоздушный тип ТС-8М                  ТУ 64-1-1382-72

Фильтр АФА-ВП-20 с фильтродержателем               ТУ 957186-76

Холодильник бытовой                                ГОСТ 26678-85

Цилиндр мерный 2-100                               ГОСТ 1770-74.

 

Реактивы, растворы, материалы

 

Лимонная кислота моногидрат, ч.д.а.

0,1 М раствор                                        ГОСТ 3652-69

Натрий фосфорнокислый однозамещенный,

двухводный                                           ГОСТ 245-76

Натрий фосфорнокислый двузамещенный

12-водный, ч.д.а.                                    ГОСТ 11773-76

Натрий хлорид (ГФ, Х, 426) 0,85; 2,92%.

 

Приготовление 0,1 моль/л фосфатного буферного раствора рН 7,2 +/- 0,1. 35,5 г натрия фосфорнокислого двузамещенного растворяют в 1000 мл дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 мл.

4 г натрия фосфорнокислого однозамещенного растворяют 250 мл воды в мерной колбе вместимостью 250 мл.

1000 мл раствора натрия фосфорнокислого двузамещенного и 250 мл раствора натрия фосфорнокислого однозамещенного смешивают в стакане вместимостью 2000 мл.

Раствор хранится в течение 2 месяцев в холодильнике.

Приготовление буфера "А". 1000 мл фосфатного буферного раствора рН 7,2 смешивают с 8,47 г хлористого натрия. Раствор хранят в холодильнике в течение 2 месяцев.

Твин-20 "Серва", ФРГ.

Приготовление буфера "В". К 1000 мл раствора фосфатного буфера рН 7,2 +/- 0,1 прибавляют 29,2 г хлористого натрия и 1 мл твина-20. Раствор хранят в холодильнике в течение 2 месяцев.

Приготовление 0,1 моль/л фосфатноцитратного буферного раствора рН 5,0 +/- 0,1. В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 7,3 г лимонной кислоты (моногидрат) и 9,47 г натрия фосфорнокислого однозамещенного безводного и доводят раствор до метки дистиллированной водой при перемешивании. Раствор хранят при температуре -10 °С в течение 6 месяцев.

О-фенилендиамин, х.ч., 0,04%-ный раствор           ТУ 6-09-5880-69.

Приготовление 0,04% раствора о-фенилендиамина. Навеску 10 г о-фенилендиамина растворяют в 24 мл фосфатноцитратного буфера в стакане вместимостью 50 мл. Раствор готовят непосредственно перед измерением.

    Перекись водорода                                ГОСТ 10929-76.

Приготовление раствора субстратной смеси. К 24 мл раствора о-фенилендиамина прибавляют дозатором вместимостью 20 мкл 14 мкл концентрированной перекиси водорода. Смесь готовят непосредственно перед измерениями.

Стрептодеказа раствора с = 0,6 мкг/мл,

С = 0,12 мкг/мл                                     ФС 42-2471-87.

Приготовление основного раствора стрептодеказы с концентрацией 0,6 мкг/мл. Точную навеску 25 мг (7,2% белка) стрептодеказы растворяют в 6 мл дистиллированной воды. Массовая концентрация стрептодеказы в полученном растворе составляет 0,30 мг/мл. Из полученного раствора отбирают 1 мл дозатором на 1 мл и вносят в мерную колбу, вместимостью 500 мл. Объем доводят до метки дистиллированной водой.

Используют свежеприготовленный раствор.

Приготовление раствора стрептодеказы с концентрацией 0,12 мкг/мл. 5 мл основного раствора стрептодеказы пипеткой вместимостью 5 мл переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем доводят до метки буфером "А". Используют свежеприготовленный раствор.

Серная кислота, х.ч., концентрированная

4 М раствор                                          ГОСТ 4204-77.

Приготовление 4 М раствора серной кислоты. К 8,5 дистиллированной воды, используя пипетку вместимостью 1 мл, добавляют 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Раствор хранят при комнатной температуре.

Антисыворотка к стрептодеказе,

ВНИТИАФ.

Приготовление раствора антисыворотки. Содержимое флакона с лиофилизированной антисывороткой к стрептодеказе растворяют в 5 мл буфера "В", используя пипетку вместимостью 5 мл.

Далее из полученного раствора отбирают 0,5 мл дозатором на 1 мл и переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, доводят объем до метки буфером "В". Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

Подготовка сенсибилизированного планшета. Раствор стрептодеказы с концентрацией 0,12 мкг/мл заливают дозатором вместимостью 0,2 мл по 0,2 мл во все лунки (кроме А1) полистиролового планшета для ИФА. Планшет закрывают крышкой и выдерживают 18 часов в холодильнике. Из лунок выливают раствор стрептодеказы и промывают 4 раза буфером "В" с помощью полуавтоматической промывалки.

Сенсибилизированный таким образом планшет используют в анализе или запаивают в полиэтиленовый мешок и хранят в холодильнике в течение 3 месяцев.

Антитела диагностические против иммуноглобулинов кролика, меченные пероксидазой, ВФС 42-8-ВС-85 (антивидовой конъюгат).

Приготовление раствора антивидового конъюгата. Содержимое ампулы с антивидовым конъюгатом растворяют в 20 мл буфера "В", используя пипетку вместимостью 10 мл. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

 

Отбор пробы воздуха

 

Воздух с объемным расходом 10 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, закрепленный в фильтродержателе. Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 50 л воздуха. Пробы хранят менее суток.

 

Подготовка к выполнению измерений

 

Градуировочны растворы готовят согласно таблице. Хранят в холодильнике не более 3 суток.

 

Таблица

 

ШКАЛА ГРАДУИРОВОЧНЫХ РАСТВОРОВ

 

    N    
стандартов

  Основной р-р  
стрептодеказы, мл

Вода,
  мл 

Концентрация стрептодеказы в
градуировочном р-ре, мкг/мл

1        

0,2             

0,2  

0,300                      

2        

0,2             

0,6  

0,150                      

3        

0,2             

1,4  

0,080                      

4        

0,2             

2,8  

0,040                      

5        

0,2             

3,8  

0,030                      

6        

0,2             

5,8  

0,020                      

 

Проведение анализа

 

1. Во все промытые, не содержащие раствор лунки (кроме А1) предварительно сенсибилизированного планшета заливают с помощью дозатора на 0,1 мл по 0,1 мл раствора антисыворотки, затем в лунки В1, С1 заливают по 0,1 мл буфера "В", в лунки 2 - 7 рядов А, В, С - по 0,1 мл градуировочных растворов. Для каждого стандартного раствора отводят по 3 лунки. Во всех лунках общий объем составляет 0,2 мл, лунка А1 остается пустой.

Планшет закрывают крышкой и инкубируют 1,5 ч при температуре 37 °С.

2. Выливают содержимое планшета и промывают его 4 раза буфером "В".

3. Во все лунки (кроме А1) вносят по 0,2 мл раствора антивидового конъюгата, закрывают планшет крышкой и инкубируют 1,5 ч при температуре 37 °С.

4. Четырехкратная промывка по п. 2.

5. Проведение ферментативной реакции.

В каждую лунку вносят дозатором на 0,1 мл по 0,1 мл раствора с субстратной смесью. Инкубируют по секундомеру 10 мин. Затем в той же последовательности в лунки вносят дозатором на 0,2 мл по 0,075 мл раствора 4 М серной кислоты для остановки реакции.

6. Для измерения оптической плотности растворов в лунках планшет помещают в рамку считывателя АКИ.Ц.0,1. Измерение проводят при длине волны 492 нм, причем в качестве раствора сравнения используют раствор субстратной смеси в лунке А1.

Строят градуировочный график. На масштабно-координатной бумаге по оси абсцисс откладывают концентрацию стрептодеказы в градуировочных растворах в единицах концентрации (мкг/мл), а по оси ординат - значения оптической плотности при длине волны 492 нм. Градуировочный график строят одновременно с проведением измерений в пробах.

 

Проведение измерения

 

После отбора пробы воздуха фильтры АФА-ВП-20 помещают в стаканы вместимостью 50 мл и приливают 20 мл буфера "А", периодически встряхивая, выдерживают в течение 10 мин. Затем с помощью дозатора на 1 мл отбирают 1 мл раствора и переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, объем доводят до метки буфером "В".

Анализ проводят аналогично процедуре при построении калибровочной зависимости.

Растворы могут храниться до проведения анализа в течение 2 суток в холодильнике.

По градуировочному графику на основании измерения значений оптической плотности в растворах проб определяют соответствующие концентрации стрептодеказы в пробах (мкг/мл).

 

Расчет концентрации

 

Концентрацию стрептодеказы (С) в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

 

                                а х в

                            С = -----,

                                V х К

 

где:

а - концентрация стрептодеказы в анализируемом растворе, мкг;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

К - коэффициент десорбции вещества с фильтра, равный 0,85.

 

Методические указания разработаны ВНИИТИАФ, г. С.-Петербург.

 

 

 

 

 

Приложение 1

 

ПРИВЕДЕНИЕ ОБЪЕМА ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ

(ТЕМПЕРАТУРА 20 °С И ДАВЛЕНИЕ 760 ММ РТ. СТ.)

 

Приведение объема воздуха к стандартным условиям проводят по формуле:

 

                           V  х (273 + 20) х Р

                            t

                     V   = -------------------,

                      ст    (273 + t°) х 760

 

    где:

    V  - объем воздуха, отобранного для анализа, л;

     t

    Р  -  барометрическое  давление,  мм рт. ст. (760 мм рт. ст. =

101,33 кПа);

    t° - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

    Для   удобства   расчета  V    следует  пользоваться  таблицей

                               ст

коэффициентов  (Приложение  2).  Для  приведения  объема воздуха к

температуре  20  °С  и  давлению  760 мм рт. ст. (101,33 кПа) надо

умножить V  на соответствующий коэффициент.

          t

 

 

 

 

 

Приложение 2

 

КОЭФФИЦИЕНТ К ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА

ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ

 

                       Давление Р, кПа/мм рт. ст.                       

°С

 730 

 734 

 738 

 742 

 746 

 750 

 754 

 758 

 760 

 764 

-30

1,1582

1,1646

1,1709

1,1772

1,1836

1,1899

1,1963

1,2026

1,2058

1,2122

-26

1,1393

1,1456

1,1519

1,1581

1,1644

1,1705

1,1768

1,1831

1,1862

1,1925

-22

1,1212

1,1274

1,1336

1,1396

1,1458

1,1519

1,1581

1,1643

1,1673

1,1735

-18

1,1036

1,1097

1,1158

1,1218

1,1278

1,1338

1,1399

1,1400

1,1490

1,1551

-14

1,0866

1,0926

1,0986

1,1045

1,1105

1,1164

1,1224

1,1284

1,1313

1,1373

-10

1,0701

1,0760

1,0819

1,0877

1,0986

1,0994

1,1053

1,1112

1,1141

1,1200

-6

1,0540

1,0599

1,0657

1,0714

1,0772

1,0829

1,0887

1,0945

1,0974

1,1032

-2

1,0385

1,0442

1,0499

1,0556

1,0613

1,0669

1,0726

1,0784

1,0812

1,0869

0 

1,0309

1,0366

1,0423

1,0477

1,0535

1,0591

1,0648

1,0705

1,0733

1,0789

+2

1,0234

1,0291

1,0347

1,0402

1,0459

1,0514

1,0571

1,0627

1,0655

1,0712

+6

1,0087

1,0143

1,0198

1,0253

1,0309

1,0363

1,0419

1,0475

1,0502

1,0557

+10

0,9944

0,9999

1,0054

1,0108

1,0162

1,0216

1,0272

1,0326

1,0353

1,0407

+14

0,9806

0,9860

0,9914

0,9967

1,0027

1,0074

1,0128

1,0183

1,0209

1,0263

+18

0,9671

0,9725

0,9778

0,9880

0,9884

0,9936

0,9989

1,0043

1,0069

1,0122

+20

0,9605

0,9658

0,9711

0,9783

0,9816

0,9868

0,9921

0,9974

1,0000

1,0053

+22

0,9539

0,9592

0,9645

0,9696

0,9749

0,9800

0,9853

0,9906

0,9932

0,9985

+24

0,9475

0,9527

0,9579

0,9631

0,9683

0,9735

0,9787

0,9839

0,9865

0,9917

+26

0,9412

0,9464

0,9516

0,9566

0,9618

0,9669

0,9721

0,9773

0,9799

0,9851

+28

0,9349

0,9401

0,9453

0,9503

0,9655

0,9605

0,9657

0,9708

0,9734

0,9785

+30

0,9288

0,9339

0,9891

0,9440

0,9432

0,9542

0,9594

0,9645

0,9670

0,9723

+34

0,9167

0,9218

0,9268

0,9318

0,9368

0,9418

0,9468

0,9519

0,9544

0,9595

+38

0,9049

0,9099

0,9149

0,9198

0,9248

0,9297

0,9347

0,9397

0,9421

0,9471

 

 



Мегабиблиотека по охране труда и технике безопасности. // Некоммерческий проект для инженеров по охране труда. //

Рейтинг@Mail.ru Яндекс цитирования

Copyright © www.УЦОТ.рф, 2012 - 2018