Утверждаю
И.о. Председателя
Госкомсанэпиднадзора
России,
Заместитель
Главного
государственного
санитарного
врача Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
8 июня 1996 года
Дата введения:
с момента
утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ
В-ЭКЗОТОКСИНА
(ТУРИНГИНА-1) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.268-96
1. Методические
указания по измерению концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны
(выпуск 30) разработаны с целью обеспечения контроля
соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно
допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия
(ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при
осуществлении санитарного контроля.
2. Методические
указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны
утверждены и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем
Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.
3. Введены впервые.
4. Методические
указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и
подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88. ССБТ "Воздух
рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТа
12.1.016-79. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения
концентраций вредных веществ" и ГОСТа Р 1.5-92,
п. 7.3.
Методические
указания одобрены на совместном заседании группы Главного эксперта Федеральной
комиссии по санитарно-гигиеническому нормированию "Лабораторно-инструментальное
дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции
"Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные
основы гигиены труда и профпатологии".
Ответственные
исполнители: Г.А. Дьякова, С.И. Муравьева.
Исполнители: Г.А.
Дьякова, Н.С. Горячев, Л.Г. Макеева, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.В.
Грыжина, Е.Н. Грицун.
Структурная формула
(не приводится).
C H
O N P
22 35 19
5
В-экзотоксин
(турингин-1) - биологический препарат, применяется в сельском и лесном хозяйстве
против колорадского жука, паутинного клеща, хлопковых совок и др. вредителей
растений.
Представляет собой
порошок от коричневого до светло-бежевого цвета,
растворим в воде и не растворим в органических растворителях. Действующим
началом турингина является В-экзотоксин, содержание которого в препарате в
среднем - +/- 1%. В воздухе находится в виде аэрозоля.
ПДК в воздухе- 1
мг/куб. м.
Характеристика
метода
Определение
основано на хроматографическом разделении препарата в тонком слое силикагеля
(силуфол-UV 254) с последующим спектрометрическим
измерением концентраций.
Отбор проб
производится с концентрированием на фильтр АФА-ВП-20.
Нижний предел
измерения в анализируемой пробе - 3 мкг.
Нижний предел
измерения в воздухе - 0,06 мг/куб. м (при отборе 45 л воздуха).
Диапазон измеряемых
концентраций в воздухе - от 0,06 до 2 мг/куб. м.
Граница суммарной
погрешности измерения +/- 20%.
Определению не
мешает присутствие полупродуктов производства экзотоксина.
Реактивы,
растворы, материалы
Экзотоксин,
х.ч.
Пропанол,
х.ч. ГОСТ
ТУ 6-09-783-76
Ацетон,
ч.
ГОСТ 2603-79
Дистиллированная
вода.
Основной
стандартный раствор N 1 готовят растворением 100 мг экзотоксина в 100 мл
дистиллированной воды, получают раствор, содержащий 1 мг/мл экзотоксина.
Стандартный раствор
N 2 готовят путем разбавления основного стандартного раствора N 1 или
растворением 10 мг экзотоксина в 10 мл дистиллированной воды, получают раствор,
содержащий 0,1 мг/мл или 100 мг/мл экзотоксина.
Срок хранения
растворов - 5 суток.
Приготовление
рабочих растворов с содержанием экзотоксина 15,05; 50; 100; 300; 500 мкг/мл -
(см. табл.).
Приборы,
аппаратура, посуда
Аспирационное
устройство с реометром ТУ
64-1-862-77
Фильтры
АФА-ВП-20
Фильтродержатели
Фарфоровые
чашки диаметром 4 - 5 см
Баня
водяная
Колбы
мерные вместимостью 50 и 100 мл
ГОСТ 1770-74
Микропипетки
вместимостью 0,1 - 0,2 мл
ГОСТ 20292-74
Микрошприц
вместимостью 1 мл
Пластинка
для тонкослойной хроматографии
размером
150 х 150 мм (ЧСФР)
"Силуфол-254"
Хроматографическая
пластинка "Силуфол"
Химические
стаканы вместимостью 50 мл
Хроматографическая
камера размером ГОСТ
1056-63
150
х 200 или 105 х 165 мм
Хроматоскоп
Лампа
УФ-света (лямбда = 254 мм)
Центрифужные
пробирки
Центрифуга
на 3000 об./мин., МЛР-1
Пипетки
вместимостью 1, 5, 10 мл
ГОСТ 20292-74
Спектрофотометр
СФ-26 М.
Отбор пробы
воздуха
Воздух со скоростью
15 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, закрепленный в фильтродержателе.
Для определения 1/2
ПДК достаточно отобрать 6 л воздуха. После отбора пробы фильтры складывают
загрязненной стороной внутрь, помещают в пакеты и доставляют в лабораторию.
Срок хранения
отобранных проб - 5 суток.
Условия
анализа
Фильтры с
отобранной пробой помещают в химический стакан, затем промывают дважды 2 - 3 мл
дистиллированной воды, тщательно отжимают фильтр стеклянной палочкой и сливают
в фарфоровую чашку, которую устанавливают на водяную баню. Выпаривают
содержимое до сухого остатка и растворяют в 0,2 - 0,3 мл воды и всю пробу
количественно с помощью микропипетки наносят на стартовую линию
хроматографической пластинки в одну точку с помощью микропипетки или
микрошприца так, чтобы диаметр пятна не превышал 0,5 см. Остаток в чашке еще 2
раза тщательно смывают по 0,1 мл дистиллированной водой и наносят в центр того
же пятна. На стартовую линию той же пластинки в различные точки,
расположенные друг от друга на расстоянии 2 см, наносят по 0,2 мл рабочих
растворов, содержащих 15, 50, 100, 300 и 500 мкг/мл экзотоксина, что
соответствует 3; 10; 20; 60; 100 мкг препарата. Пластинку с нанесенными
растворами помещают в хроматографическую камеру, которую за 30 мин. до
хроматографирования заливают смесью: пропанол, ацетон, вода в соотношении
15:5:1. После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 см пластинку
вынимают и оставляют на несколько мин. до его испарения. Затем под
хроматоскопом обнаруживают зоны локализации препаратов, проявляющихся в виде
сине-фиолетовых пятен на голубом фоне с величиной Rf = 0,78 при использовании
пластинок "Силуфол"-UV 254. Под УФ-светом
(лямбда = 254 нм) зоны локализации препарата проявляется в виде желтоватых
пятен на светлом фоне с величиной Rf = 0,68.
Расчет
концентраций
Количественное
определение проводят путем сравнения площадей пятен стандартных растворов и
проб. Между количеством препарата и площадью его пятен на пластинке существует
прямая пропорциональная зависимость.
При большом
содержании препарата в пробе следует использовать для анализа меньшую часть
анализируемого экстракта.
Содержание
экзотоксина (С) в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:
а х в
С = -----,
б х V
где:
а - количество
экзотоксина, найденное в анализируемом объеме пробы, мкг;
в - общий объем
пробы, мл;
б - объем пробы, взятой для анализа, мл;
V - объем воздуха,
отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).
Количественная
оценка результатов анализа
методом
УФ-спектрофотометрирования
Полученные на
хроматограмме пятна пробы и стандарта снимают осторожно скальпелем и высыпают
слой сорбента в центрифужные пробирки. Затем в пробирки добавляют по 4 мл
дистиллированной воды и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 5 - 10 мин.
Недостаточный
прозрачный раствор осторожно пипеткой отсасывают в прямоугольные кварцевые
кюветы с L = 10 мм и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре
при длине волны 240 нм.
Количественное
определение экзотоксина в пробе проводят по калибровочному графику.
Для построения
калибровочного графика готовят шкалу стандартов в соответствии с таблицей.
Таблица
ШКАЛА
СТАНДАРТОВ
|
N
стандарта
|
Стандартный
р-р N 1,
1 мл - 100
мкг
|
Стандартный
р-р N 2,
1 мл - 1000
мкг
|
Дистилли-
рованная
вода, мл
|
Рабочие
р-ры,
мкг/мл
|
Содержание
экзотоксина
в анализируемой пробе
(0,2 мл), мкг
|
|
1
|
0
|
-
|
0
|
0
|
0
|
|
2
|
1,5
|
-
|
8,5
|
15
|
3
|
|
3
|
5,0
|
-
|
5,0
|
50
|
10
|
|
4
|
-
|
1
|
9,0
|
100
|
20
|
|
5
|
-
|
3
|
7,0
|
300
|
60
|
|
6
|
-
|
5
|
5,0
|
500
|
100
|
Стандартные
растворы наносят на чистую хроматографическую пластинку и обрабатывают
аналогично пробам.
Измеряют величину
оптической плотности стандартных растворов на спектрофотометре при длине волны
240 мм и по полученным средним данным из пяти определений строят калибровочный
график "количество препарата (мкг) - оптическая плотность".
Концентрацию
экзотоксина (мг/куб. м) воздуха (Х) вычисляют по формуле:
А
Х = -,
V
где:
А - количество
экзотоксина, найденное в анализируемом объеме пробы по калибровочному графику,
мкг;
V - анализируемый
объем воздуха, приведенного к нормальным условиям, л.
Методические
указания разработаны НИИ гигиены труда и профзаболеваний, г. Ташкент.
Приложение
1
ПРИВЕДЕНИЕ
ОБЪЕМА ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
(ТЕМПЕРАТУРА 20 °С И ДАВЛЕНИЕ 760 ММ РТ. СТ.)
Приведение объема
воздуха к стандартным условиям проводят по формуле:
V х (273 + 20) х Р
t
V = -------------------,
ст
(273 + t°) х 760
где:
V - объем воздуха, отобранного для анализа, л;
t
Р - барометрическое давление,
мм рт. ст. (760 мм рт. ст. =
101,33 кПа);
t° -
температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
Для удобства
расчета V следует
пользоваться таблицей
ст
коэффициентов
(Приложение 2). Для
приведения объема воздуха к
температуре
20 °С и
давлению 760 мм рт. ст. (101,33
кПа) надо
умножить V на
соответствующий коэффициент.
t
Приложение
2
КОЭФФИЦИЕНТ
К ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА
ВОЗДУХА К
СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
|
Давление Р, кПа/мм рт. ст.
|
|
°С
|
730
|
734
|
738
|
742
|
746
|
750
|
754
|
758
|
760
|
764
|
|
-30
|
1,1582
|
1,1646
|
1,1709
|
1,1772
|
1,1836
|
1,1899
|
1,1963
|
1,2026
|
1,2058
|
1,2122
|
|
-26
|
1,1393
|
1,1456
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1644
|
1,1705
|
1,1768
|
1,1831
|
1,1862
|
1,1925
|
|
-22
|
1,1212
|
1,1274
|
1,1336
|
1,1396
|
1,1458
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1643
|
1,1673
|
1,1735
|
|
-18
|
1,1036
|
1,1097
|
1,1158
|
1,1218
|
1,1278
|
1,1338
|
1,1399
|
1,1400
|
1,1490
|
1,1551
|
|
-14
|
1,0866
|
1,0926
|
1,0986
|
1,1045
|
1,1105
|
1,1164
|
1,1224
|
1,1284
|
1,1313
|
1,1373
|
|
-10
|
1,0701
|
1,0760
|
1,0819
|
1,0877
|
1,0986
|
1,0994
|
1,1053
|
1,1112
|
1,1141
|
1,1200
|
|
-6
|
1,0540
|
1,0599
|
1,0657
|
1,0714
|
1,0772
|
1,0829
|
1,0887
|
1,0945
|
1,0974
|
1,1032
|
|
-2
|
1,0385
|
1,0442
|
1,0499
|
1,0556
|
1,0613
|
1,0669
|
1,0726
|
1,0784
|
1,0812
|
1,0869
|
|
0
|
1,0309
|
1,0366
|
1,0423
|
1,0477
|
1,0535
|
1,0591
|
1,0648
|
1,0705
|
1,0733
|
1,0789
|
|
+2
|
1,0234
|
1,0291
|
1,0347
|
1,0402
|
1,0459
|
1,0514
|
1,0571
|
1,0627
|
1,0655
|
1,0712
|
|
+6
|
1,0087
|
1,0143
|
1,0198
|
1,0253
|
1,0309
|
1,0363
|
1,0419
|
1,0475
|
1,0502
|
1,0557
|
|
+10
|
0,9944
|
0,9999
|
1,0054
|
1,0108
|
1,0162
|
1,0216
|
1,0272
|
1,0326
|
1,0353
|
1,0407
|
|
+14
|
0,9806
|
0,9860
|
0,9914
|
0,9967
|
1,0027
|
1,0074
|
1,0128
|
1,0183
|
1,0209
|
1,0263
|
|
+18
|
0,9671
|
0,9725
|
0,9778
|
0,9880
|
0,9884
|
0,9936
|
0,9989
|
1,0043
|
1,0069
|
1,0122
|
|
+20
|
0,9605
|
0,9658
|
0,9711
|
0,9783
|
0,9816
|
0,9868
|
0,9921
|
0,9974
|
1,0000
|
1,0053
|
|
+22
|
0,9539
|
0,9592
|
0,9645
|
0,9696
|
0,9749
|
0,9800
|
0,9853
|
0,9906
|
0,9932
|
0,9985
|
|
+24
|
0,9475
|
0,9527
|
0,9579
|
0,9631
|
0,9683
|
0,9735
|
0,9787
|
0,9839
|
0,9865
|
0,9917
|
|
+26
|
0,9412
|
0,9464
|
0,9516
|
0,9566
|
0,9618
|
0,9669
|
0,9721
|
0,9773
|
0,9799
|
0,9851
|
|
+28
|
0,9349
|
0,9401
|
0,9453
|
0,9503
|
0,9655
|
0,9605
|
0,9657
|
0,9708
|
0,9734
|
0,9785
|
|
+30
|
0,9288
|
0,9339
|
0,9891
|
0,9440
|
0,9432
|
0,9542
|
0,9594
|
0,9645
|
0,9670
|
0,9723
|
|
+34
|
0,9167
|
0,9218
|
0,9268
|
0,9318
|
0,9368
|
0,9418
|
0,9468
|
0,9519
|
0,9544
|
0,9595
|
|
+38
|
0,9049
|
0,9099
|
0,9149
|
0,9198
|
0,9248
|
0,9297
|
0,9347
|
0,9397
|
0,9421
|
0,9471
|
|