Оставьте ссылку на эту страницу в соцсетях:

Поиск по базе документов:

 

Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

20 сентября 2001 года

 

Дата введения:

с момента утверждения

 

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК

ШТАММА-ПРОДУЦЕНТА ТИЛОЗИНА STREPTOMYCES FRADIAE БС-1

В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.2.1068-01

 

1. Разработаны д.м.н. Ивановым Н.Г., к.б.н. Шенной Н.И. (Российский государственный медицинский университет).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

 

1. Общие положения и область применения

 

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха.

Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля штамма Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе производственных помещений биотехнологических производств и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ. Методики выполнения измерений".

Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий научно-исследовательских институтов, работающих в области промышленной гигиены.

 

2. Биологическая характеристика штамма-продуцента

Streptomyces fradiae БС-1 и его гигиенический норматив

 

Систематическое положение штамма-продуцента

 

    Порядок      Actinomycetales

    Класс        Actinomycetes

    Семейство    Streptomycetaceae

    Род          Streptomyces

    Вид          fradiae

    Штамм        БС-1

 

Культурально-морфологические особенности штамма

Штамм Streptomyces fradiae БС-1 является облигатным аэробом, растет на различных питательных средах: СР-6, СР-15, Гаузе-1, Ваксмана путем инкубирования в термостате при температуре 28 °С. Продолжительность развития составляет 10 - 15 суток.

Четкие культурально-морфологические свойства штамма проявляются на агаризованной среде СР-15 на 3 день развития. На этой среде штамм образует 6 морфологических типов колоний, из которых наиболее характерный тип составляет более 70%. Изучаемый штамм представлен округлыми колониями до 9 мм в диаметре (в зависимости от плотности посева). Белый воздушный мицелий образуется в центре колонии и по периферии в виде одной, реже двух концентрических окружностей, край колоний не опушен. Профиль изогнутый, поверхность шероховатая, неопушенные части колоний гладкие, блестящие, кремовые. Структура мелкозернистая, по краю неопушенной части однородная. Консистенция плотная, пигмент с обратной стороны колоний желтовато-коричневый.

Предельно допустимая концентрация Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны - 2000 кл/куб. м, пометка А, 3 класс опасности.

 

3. Пределы измерений

 

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента тилозина в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м при доверительной вероятности 0,95.

 

4. Метод измерений

 

Метод измерения концентрации штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1 основан на аспирации аппаратом Кротова микробных клеток (спор, обрывков мицелия) на поверхность плотной питательной среды СР-15 и подсчете выросших колоний, которые выявляются при задержке роста тест-культуры (Bacillus subtilis), происходящего вследствие диффузии в агар антибиотика, выделяемого штаммом-продуцентом Streptomyces fradiae БС-1.

При данном методе на чашке Петри после забора пробы может быть учтено до 50 колоний, т.к. большее количество колоний на чашке могут образовывать сливающиеся зоны лизиса, что приводит к занижению результатов.

 

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

 

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

 

5.1. Средства измерений, вспомогательные

устройства, материалы

 

Прибор для бактериологического анализа воздуха,

модель 818 (щелевой прибор Кротова)                ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные

или водяные

Автоклав электрический                             ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной

системой типа "Биолам" Л-211

Водяная баня или водяной термостат

Газовая горелка или спиртовка лабораторная

Чашки Петри

Петли бактериологические

Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл     ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                     ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                     ГОСТ 1770-74

Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл         ГОСТ 1770-74

Секундомер                                         ГОСТ 9586-75

Барометр                                           ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                  ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                  ГОСТ 25556-81.

 

5.2. Реактивы, растворы

 

Среда СР-15, агаризованная питательная

среда для продуцента тилозина (состав в %:

меласса - 0,5, крахмал - 0,5, соевая мука - 0,5,

кукурузный экстракт - 0,5, (NH ) SO  - 0,1,

                              4 2  4

NaCl - 0,1, MgSO  х 7H O - 0,05, СаСО  - 0,2,

                4     2              3

агар - 1,5; рН среды до стерилизации 7,0 - 7,2;

режим стерилизации 1,1 - 1,2 атм., 40 - 50 мин.)

Агаризованная среда Хоттингера, рН 6,8 - 7,0

Спирт этиловый ректификат                          ГОСТ 5962-67

Хлороформ

Тетрациклина гидрохлорид

Амфотерицин В для внутривенного введения

Тест-культура Вас. subtilis вариант Л  - музейный

                                     2

штамм, споры хранят в виде водной суспензии при

температуре 4 °С.

 

6. Требования безопасности

 

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента Биовита и хлортетрациклина в воздухе рабочей зоны соблюдают:

- правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;

- правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации приборов;

- требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980);

- положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).

 

7. Требования к квалификации оператора

 

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

 

8. Условия измерений

 

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

 

9. Проведение измерений

 

9.1. Условия отбора проб воздуха

 

Для определения концентрации Streptomyces fradiae БС-1 воздух производственных помещений аспирируют со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды СР-15 в чашку Петри, помещенную в аппарат Кротова.

Аппарат Кротова перед каждым отбором воздуха тщательно протирают спиртом. На подвижный диск устанавливают чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Крышку прибора закрывают. После отбора пробы воздуха и остановки диска открывают крышку прибора, снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. В период отбора проб воздуха крышку чашки Петри хранят в стерильном пакете из бумаги, полиэтилена или других стерильных емкостях.

Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны.

Отбор проб сопровождается составлением акта отбора с указанием места, времени и условий отбора.

 

9.2. Выполнение анализа

 

Агаризованную среду СР-15 расплавляют и остужают до 50 - 60 °С. Затем добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде амфотерицин для инъекций из расчета 20 мкг на 1 л среды для подавления посторонней воздушной грибковой флоры, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри по 10 мл. Чашки с застывшей средой помещают в термостат при 37 °С на сутки, после чего проросшие чашки бракуют.

После отбора проб воздуха на чашки Петри в аппарате Кротова их помещают в термостат при температуре 28 - 30 °С на 48 ч.

После инкубации чашки помещают в вытяжной шкаф. На внутреннюю поверхность наливают 1,5 мл хлороформа, чашку с посевом вверх донышком вставляют в крышку так, чтобы выросшие колонии бактерий находились в парах хлороформа не менее 20 - 30 мин. Затем каждую чашку вынимают из крышки, выливают оставшийся хлороформ, снова закрывают крышками и переносят в бокс. Чашки оставляют в боксе на 2 ч при комнатной температуре для преддиффузии.

    Затем чашки Петри заливают 5 мл агаризованной среды Хоттингера

                                                                 7

с  тест-культурой  Вас.  subtilis  вариант  Л   из расчета 3 х 10

                                             2

споровых  клеток  на  1 мл среды (Государственная фармакопея СССР,

изд. XI, 1989, с. 206).

Чашки Петри с застывшей средой Хоттингера донышком вверх помещают в термостат при 37 °С на сутки. По окончании инкубации, т.е. через 3 суток после отбора пробы воздуха производят подсчет зон задержки роста тест-культуры, которые соответствуют числу проросших клеток штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1. Учитывают зоны диаметром не менее 5 мм.

 

10. Вычисление результатов измерений

 

Расчет концентрации микробных клеток Streptomyces fradiae БС-1 в 1 куб. м воздуха производят по формуле:

 

                             П х 1000

                         Х = --------,

                              Т х В

 

где:

Х - количество микробных клеток в воздухе (1 куб. м);

П - число зон задержки роста тест-культуры, что соответствует числу колоний, выросших на чашке Петри;

Т - время забора пробы воздуха, мин.;

В - скорость подачи воздуха, л/мин.;

1000 - коэффициент перевода 1 л в 1 куб. м.

 

11. Оформление результатов измерений

 

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

 

Протокол N ____

количественного микробиологического анализа

штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1

в воздухе рабочей зоны

 

Дата проведения анализа ______________________________

Место отбора пробы ___________________________________

Название лаборатории _________________________________

Юридический адрес организации ________________________

 

Результаты микробиологического анализа

 

Шифр или N пробы

Определяемый микроорганизм

    Концентрация,  
      кл./куб. м   

 

 

 

 

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

 

Список литературы

 

1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

2. ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ. Методики выполнения измерений".

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).

5. Государственная фармакопея СССР, 1989, изд. XI, с. 206.

 

 



Мегабиблиотека по охране труда и технике безопасности. // Некоммерческий проект для инженеров по охране труда. //

Рейтинг@Mail.ru Яндекс цитирования

Copyright © www.УЦОТ.рф, 2012 - 2018