Оставьте ссылку на эту страницу в соцсетях:

Поиск по базе документов:

 

Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

20 сентября 2001 года

 

Дата введения:

с момента утверждения

 

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК

МИКРООРГАНИЗМА TRICHODERMA LONGIBRACHIATUM TW-1 - ПРОДУЦЕНТА

БЕТА-ГЛЮКАНАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.2.1070-01

 

1. Разработаны к.м.н. В.И. Бобровым (ВНЦ по безопасности биологически активных веществ).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

 

1. Общие положения и область применения

 

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма - Trichoderma longibrachiatum TW-1 - продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 6000 клеток в 1 куб. м воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

 

2. Характеристика штамма-продуцента бета-глюканазы

 

Продуцент бета-глюканазы Trichoderma longibrachiatum TW-1 относится к классу несовершенных грибов. Рост характерных колоний определяется на 5 - 6 сутки. На агаризованной среде СМ микроорганизм образует характерные колонии до 15 мм в диаметре с гладкой подошвой, не врастающие в агар, с волнистым краем, пушистым воздушным мицелием, который покрыт спорами белого и желтого цвета. Гифы мицелия бесцветные, септированные, многократно ветвистые. Оптимальная температура роста 28 - 30 °С.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 5000 кл./куб. м, 3 класс опасности, пометка А.

 

3. Пределы измерений

 

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 6000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95.

 

4. Метод измерений

 

Метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток (спор, фрагментов мицелия) продуцента бета-глюканазы на поверхность плотной питательной среды СМ и подсчете выросших колоний по зонам просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма как результат продукции бета-глюканазы на среде с окрашенной целлюлозой.

 

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

 

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

 

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства,

материалы

 

Прибор для бактериологического анализа

воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)        ТУ 64-12791 77

Термостаты электрические суховоздушные или

водяные

Автоклав электрический                              ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной

системой типа "Биолам" Л-211

Лупа с увеличением х 10                             ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные

стеклянные диаметром 100 мм

Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл      ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 1770-74

Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл          ГОСТ 1770-74

Секундомер                                          ГОСТ 9586-75

Барометр                                            ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                   ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                   ГОСТ 25556-81.

 

5.2. Реактивы, растворы

 

Бенгальский розовый

Диметилсульфоксид

Спирт этиловый ректификат                           ГОСТ 5962-67

Селективная среда для штамма-продуцента

бета-глюканазы

Состав среды: KH PO  - 1 г; MgSO  х 7Н О -

                2  4            4     2

0,5 г; (NH ) SO  - 5 г; целлюлоза порошковая в

          4 2  4

пересчете на сухое вещество - 5 г; глюкоза -

5 г; дрожжевой экстракт - 0,5 г; агар - 20 г;

вода дистиллированная - до 1000 мл.

 

6. Требования безопасности

 

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны соблюдают:

- правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

- правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

- требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980);

- положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

 

7. Требования к квалификации операторов

 

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

 

8. Условия измерений

 

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

 

9. Проведение измерений

 

9.1. Условия отбора проб воздуха

 

Для определения продуцента бета-глюканазы воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента, а прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки.

На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо.

После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

 

9.2. Выполнение анализа

 

Метод предполагает учет количества колоний, выросших на 2 - 3 сутки после посева проб воздуха, по зонам просветления, которые являются результатом образования целлюлаз на срезах с окрашенной целлюлозой в присутствии повышенного количества глюкозы.

Существенным признаком промышленных мутантов рода Trichoderma является пониженная катаболическая репрессия по сравнению с дикими мутантами Trichoderma. В то время как у диких штаммов глюкоза в концентрациях выше 0,02 г/л практически полностью подавляет образование целлюлаз в глубинной культуре, у промышленных мутантов подавление образования целлюлаз начинается при концентрациях глюкозы выше 1 г/л.

Селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют 50 мг/л бенгальского розового, растворенного в 1 мл диметил-сульфоксида, тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Бенгальский розовый предназначен для специфического окрашивания целлюлозы и для ограничения разрастания колоний на чашках. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при 28 - 30 °С на 2 дня и затем при температуре 44 °С на 18 ч для образования вокруг колоний зон просветления.

Количественный учет микробных клеток штамма-продуцента бета-глюканазы проводится методом подсчета зон просветления, образующихся вокруг колоний микроорганизма как результат продукции глюканазы на среде СМ с окрашенной целлюлозой.

 

10. Вычисление результатов измерений

 

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха производят по формуле:

 

                         N х 1000

                     Х = --------, кл./куб. м,

                            V

 

где:

Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;

1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

 

11. Оформление результатов измерений

 

Результаты измерений оформляют протоколом по форме:

 

Протокол N ___

количественного микробиологического анализа

штамма-продуцента Trichoderma longibrachiatum TW-1

в воздухе рабочей зоны

 

    Дата проведения анализа ______________________________________

    Место отбора пробы ___________________________________________

    Название лаборатории _________________________________________

    Юридический адрес организации ________________________________

 

Результаты микробиологического анализа

 

 Шифр или N пробы

    Определяемый   
   микроорганизм   

Концентрация, кл./куб. м

 

 

 

 

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

 

Список литературы

 

1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

2. ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ. Методики выполнения измерений".

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).

 

 



Мегабиблиотека по охране труда и технике безопасности. // Некоммерческий проект для инженеров по охране труда. //

Рейтинг@Mail.ru Яндекс цитирования

Copyright © www.УЦОТ.рф, 2012 - 2018