Оставьте ссылку на эту страницу в соцсетях:

Поиск по базе документов:

 

Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

20 сентября 2001 года

 

Дата введения:

с момента утверждения

 

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ

ПРЕПАРАТА ЭМ-1 "БАЙКАЛ" ПО ОДНОМУ ИЗ ВЕДУЩИХ КОМПОНЕНТОВ

(LACTOBACILLUS CASEI-21) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.2.1071-01

 

1. Разработаны к.м.н. Сергеюк Н.П. (Научно-исследовательский центр "Экос").

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

 

1. Общие положения и область применения

 

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегося ведущим компонентом консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1 "Байкал") в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха.

Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля концентрации препарата "Байкал ЭМ-1" по одному из ведущих компонентов Lactobacillus casei-21 в воздухе рабочей зоны и производственных помещений и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ. Методики выполнения измерений".

Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий, научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

 

2. Характеристика штамма Lactobacillus casei-21

 

Семейство: Lactobacillaceae

Род: Lactobacillus

Вид: casei

Штамм: 21.

На поверхности плотных питательных сред образует мелкие круглые колонии. Глубинные колонии - вогнутые, иногда с выростами. Форма клеток - палочки разной длины, образуют короткие и длинные цепочки, неподвижные, неспорообразующие, грамположительные. Отмечена также тенденция к образованию заметно искривленных (изогнутых) клеток.

 

3. Пределы измерений

 

    Методика  обеспечивает  выполнение измерений количества клеток

Lactobacillus  casei-21 в воздушной среде в диапазоне концентраций

от  100  до  50000  клеток  в  1  куб. м воздуха при доверительной

вероятности 0,95. ПДК     - 2000 кл./куб. м.

                     р.з.

 

4. Метод измерений

 

Метод основан на аспирации из воздуха клеток Lactobacillus casei-21 на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

 

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

 

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

 

5.1. Средства измерений,

вспомогательные устройства, материалы

 

Прибор для бактериологического анализа воздуха,    ТУ 64-12791-77

модель 818 (щелевой прибор Кротова)

Термостаты электрические суховоздушные или

водяные

Автоклав электрический                             ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные аналитические типа

ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой

типа "Биолам" Л-211

Лупа с увеличением х10                             ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные

диаметром 100 мм

Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл     ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                     ГОСТ 10515-75

Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл         ГОСТ 1770-74

Секундомер                                         ГОСТ 9586-75

Барометр                                           ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                  ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                  ГОСТ 25556-81.

 

5.2. Реактивы, растворы

 

Агар микробиологический                            ГОСТ 17206-96

Селективная среда для молочнокислых палочек

Lactobacillus casei-21

Среда Рогозы (состав питательной среды %):

дрожжевой экстракт - 0,5;

триптический гидролизат казеина - 1,0;

твин-80 - 0,1;

глюкоза - 2,0;

натрий уксуснокислый - 2,5;

лимоннокислый аммоний - 0,2;

ледяная уксусная кислота - 0,132;

соль Б - (магний сернокислый - 11,5 г; марганец

сернокислый - 2,86 г; железо сернокислое -

0,58 г; вода 100 мл) - 0,5;

калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,6,

рН среды 0,6;

вода водопроводная - 100 мл;

агар-агар - 1,5.

Стерилизация при 3/4 атмосферы 20 мин. После остывания раствора добавляют 9 мл этилового спирта для подавления посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20 мл в чашки Петри.

 

6. Требования безопасности

 

При выполнении измерений концентрации клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде соблюдают:

- правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;

- правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

- требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980);

- положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).

 

7. Требования к квалификации операторов

 

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

 

8. Условия измерений

 

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

 

9. Проведение измерений

 

9.1. Условия отбора проб воздуха

 

Для определения микроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха 20 мин. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

 

9.2. Выполнение анализа

 

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 - 4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.

Селективную среду тщательно перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри инкубируют в термостате при 36 °С, через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергают микрокопированию.

 

10. Вычисление результатов измерений

 

Расчет концентрации клеток в 1 куб. м воздуха производят по формуле:

 

                         N х 1000

                     X = --------, кл./куб. м,

                            V

 

где:

Х - концентрация клеток в воздухе;

N - количество колоний, выросших на чашке;

1000 - коэффициент перерасчета на 1 куб. м воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

Препарат "Байкал ЭМ-1" представляет собой консорциум микроорганизмов, в котором Lactobacillus casei-21 составляют 30% от общего числа микроорганизмов, Streptococcus lactis - 30%, бактерии фотосинтеза Phodopseudomonas palistris - 30%, сахаромицеты - Saccaromyces cerevisial - 10%. Концентрацию препарата "Байкал ЭМ-1" рассчитывают исходя из процентного отношения микроорганизмов, входящих в его состав, по формуле:

 

                         А = 100 х N / d,

 

где:

А - концентрация консорциума (кл./куб. м);

N - концентрация контрольного микроорганизма (кл/куб. м);

d - содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).

Контрольным микроорганизмом для данной методики является Lactobacillus casei-21.

 

11. Оформление результатов измерений

 

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

 

Протокол N ____

количественного микробиологического анализа препарата

ЭМ-1 "Байкал" в воздухе рабочей зоны

 

Дата проведения анализа ____________________________

Место отбора пробы _________________________________

Название лаборатории _______________________________

Юридический адрес организации ______________________

 

Результаты микробиологического анализа

 

 Шифр или N пробы 

     Определяемый    
    микроорганизм    

    Концентрация,   
      кл./куб. м    

 

 

 

 

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

 

 



Мегабиблиотека по охране труда и технике безопасности. // Некоммерческий проект для инженеров по охране труда. //

Рейтинг@Mail.ru Яндекс цитирования

Copyright © www.УЦОТ.рф, 2012 - 2018