Оставьте ссылку на эту страницу в соцсетях:

Поиск по базе документов:

 

Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

20 сентября 2001 года

 

Дата введения:

с момента утверждения

 

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК

МИКРООРГАНИЗМА PENICILLIUM VERMICULATUM PK-1 - ПРОДУЦЕНТ

ВЕРМИКУЛЕНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.2.1072-01

 

1. Разработаны к.б.н. Бару Р.В., к.б.н. Лапчинской А.В. (Государственный научный центр по антибиотикам).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

 

1. Общие положения и область применения

 

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 куб. м воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

 

2. Характеристика штамма-продуцента Вермикулена

 

Микроорганизм Penicillium vermiculatum PK-1 является продуцентом Вермикулена. Биологический препарат Вермикулен представляет собой живую культуру (споры и мицелиальная масса микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-1).

Penicillium vermiculatum PK-1 - аэроб, растет на жидких и агаризованных средах, оптимальная температура роста 25 - 30 °С, оптимальная рН от 5 до 8. Наиболее интенсивный рост гриба отмечается на картофельно-сахарозном агаре и агаризованной среде Чапека. На среде Чапека - Докса при культивировании при температуре 25 °С на 2 - 3 сутки образуются небольшие (2 - 5 мм в диаметре) округлые бархатистые колонии желто-бежеватого цвета, с обратной стороной от светло до темно-оливкового. Репродуктивными органами микроорганизма являются споры (конидии и обрывки мицелия).

    ПДК     - 5000 кл./куб. м.

       р.з.

 

3. Пределы измерений

 

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 30000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95.

 

4. Метод измерений

 

Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента Вермикулена на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

 

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

 

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

 

5.1. Средства измерений,

вспомогательные устройства, материалы

 

Прибор для бактериологического анализа воздуха,    ТУ 64-12791-77

модель 818 (щелевой прибор Кротова)

Термостаты электрические суховоздушные или

водяные

Автоклав электрический                             ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные аналитические типа

ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной

системой типа "Биолам" Л-211

Лупа с увеличением х10                             ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные

стеклянные диаметром 100 мм

Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл     ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                     ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                     ГОСТ 1770-74

Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл         ГОСТ 1770-74

Секундомер                                         ГОСТ 9586-75

Барометр                                           ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                  ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                  ГОСТ 25556-81.

 

5.2. Реактивы, растворы

 

Антибиотики группы аминогликозидов (канамицин,

неомицин и др.)

Спирт этиловый ректификат                          ГОСТ 5962-67

Селективная среда Чапека - Докса для штамма -

продуцента: NaNО  - 3,0 г; MgSО К НРО  - 1,0 г;

                3              4 2   4

KCL - 0,5 г; MgSО  х 7Н О - 0,5 г; FeSО  х 7Н О -

                 4     2               4     2

0,01 г; сахароза - 30 г; агар - 20 г; вода

дистиллированная - до 1000 мл; рН - 6,0;

стерилизация при 121 °С 30 мин.

 

6. Требования безопасности

 

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны соблюдают:

- правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

- правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

- требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980);

- положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

 

7. Требования к квалификации операторов

 

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

 

8. Условия измерений

 

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

 

9. Проведение измерения

 

9.1. Условия отбора проб воздуха

 

Для определения продуцента Вермикулена воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

 

9.2. Выполнение анализа

 

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 2 - 3 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор антибиотика (канамицин, неомицин) из расчета 25 - 50 мкг на 1 мл среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 - 15 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат на 25 °С. Через 48 - 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

 

10. Вычисление результатов измерения

 

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха производят по формуле:

 

                         N х 1000

                     X = --------, кл./куб. м,

                            V

 

где:

X - концентрация клеток продуцента в воздухе;

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;

1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

В случае невозможности использования аппарата Кротова, рекомендуется применять метод седиментации клеток продуцента из воздуха непосредственно на чашки Петри с плотной питательной средой. Время отбора проб воздуха может составлять до 60 мин. (при определении концентрации микроорганизма в атмосферном воздухе). При использовании этого метода пользуются следующим расчетом концентрации клеток продуцента:

эмпирически установлено, что за 5 мин. на площадь 100 куб. см оседает количество бактерий, содержащееся в 10 л воздуха, за 1 мин. - в 2 л воздуха. Площадь чашки Петри диаметром 100 мм равна 78,54 куб. см.

    Составляем пропорцию:

                      на 100 куб. см за 1 мин. оседает 2 л воздуха

                      на 78,54 куб. см         -       Х л

                                    Х = 1,57 л/мин.

Следовательно, на стеклянную чашку Петри за 1 мин. оседает 1,57 л воздуха.

Надо определить количество клеток в 1 куб. м воздуха.

На 1 чашку (диаметр 100 мм) за 1 мин. оседает количество микробов, содержащихся в 1,57 л воздуха, за Т мин. - 1,57 х Т л.

В этом количестве содержится N колониеобразующих единиц (микробных клеток - спор, обрывков мицелия), а в 1 куб. м воздуха содержится:

 

                       N х 1000   N х 636,9

                       -------- = ---------.

                       1,57 х Т       Т

 

Пример: за 30 мин. седиментации выросло 12 колоний микроорганизма. В 1 куб. м воздуха содержится:

 

                     12 х 636,9

                     ---------- = 253 клетки.

                         30

 

11. Оформление результатов измерений

 

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

 

Протокол N ___

количественного микробиологического анализа штамма

Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцента Вермикулена

в воздухе рабочей зоны

 

Дата проведения анализа _________________________________

Место отбора пробы ______________________________________

Название лаборатории ____________________________________

Юридический адрес организации ___________________________

 

Результаты микробиологического анализа

 

 Шифр или N пробы 

     Определяемый    
    микроорганизм    

    Концентрация,   
     кл./куб. м     

 

 

 

 

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

 

Список литературы

 

1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

2. ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ. Методики выполнения измерений".

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).

 

 



Мегабиблиотека по охране труда и технике безопасности. // Некоммерческий проект для инженеров по охране труда. //

Рейтинг@Mail.ru Яндекс цитирования

Copyright © www.УЦОТ.рф, 2012 - 2018