Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

 

Дата введения -

1 января 2003 года

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ ЦИПРОДИНИЛА В ВОЗДУХЕ

РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.1025-01

 

1. Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России.

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

 

1. Вводная часть

 

Фирма-производитель: Новартис (Швейцария).

Торговое название: Хорус.

Название действующего вещества по ИСО: Ципродинил.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-циклопропил-6-метил-N-фенил-пиримидин-2-амин.

Структурная формула (не приводится).

    C  H  N                                            М. м. 225,3

     14 15 3

Химически чистый Ципродинил представляет собой кремовое кристаллическое вещество с запахом.

Температура плавления - 75,9 °C.

                                         -4

    Давление паров  при    25 °C 5,1 x 10   Ра (модификация   А) и

         -4

4,71 x 10   Ра (модификация Б).

Растворимость в органических растворителях (25 °C, г/л растворителя): ацетон - 610, этанол - 160, н-гексан - 30, толуол - 460, р-октанол - 160.

Растворимость в воде (мг/л) - 20 (pH 5,5), 13 (pH 7,0), 15 (pH 9,0).

    Коэффициент  перераспределения  октанол/вода K    lg P  =  3,9

                                                  ow

(pH 5,0), 4,0 (pH 7,0), 4,0 (pH 9,0) при 25 °C.

    Величина рК  - 4,44.

               а

    Ципродинил устойчив к гидролизу  (период полуразложения больше

1 года  при pH 4 - 9). Фотолитически  быстро  разрушается  в  воде

(ДТ   0,4 - 13,5 дней).

   50

Ципродинил является среднестойким соединением с периодом полуразложения в почве 20 - 60 дней. В растениях метаболизируется посредством гидроксилирования 6-метильной группы, а также пиримидинового и фенильного ядра.

Краткая токсикологическая характеристика

    Ципродинил относится к  малотоксичным  соединениям  по  острой

пероральной   (ЛД    для  крыс  более  2000  мг/кг)  и  дермальной

                 50

токсичности (ЛД   для крыс более 2000 мг/кг) и умеренно опасным по

               50

ингаляционной (ЛК   (4 ч) более 1200 мг/куб. м) токсичности.

                 50

Не оказывает раздражающего действия на кожу и глаза кроликов.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ПДК в воздухе рабочей зоны - 0,8, в атмосферном воздухе - 0,01 мг/куб. м.

Область применения препарата

Ципродинил - системный фунгицид, хорошо проникающий в растение через листья и передвигающийся преимущественно по ксилеме. Эффективно подавляет рост мицелия различных патогенов, в т.ч. устойчивых к фунгицидам из групп триазолов, имидазолов и др. В рекомендуемых дозах не оказывает отрицательного действия на растения.

 

2. Методика измерения концентраций Ципродинила в воздухе

рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии

 

2.1. Основные положения

 

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Ципродинила методом газожидкостной хроматографии с термоионным детектором на азот.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием на последовательно соединенные бумажные фильтры "синяя лента" и трубки с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, а также пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания яблок и винограда (хлор- и фосфорорганические пестициды, сим-триазины, пиретроиды, триазолы и дитиокарбаматы).

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (P = 0,96)

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографическом объеме - 0,6 нг.

Предел обнаружения в пробе - 0,05 мг/куб. м (при отборе 20 л воздуха).

Диапазон определяемых концентраций - 0,05 - 0,75 мг/куб. м.

Среднее значение определения - 91,8%.

Стандартное отклонение (S) - 2,63%.

Относительное стандартное отклонение (DS) - 1,07%.

Доверительный интервал среднего - 2,75%.

Суммарная погрешность измерения - +/- 19%.

 

2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование

 

2.2.1. Реактивы, материалы и растворы

Ципродинил с содержанием д.в. 98,9%,

фирма Новартис

Азот, осч                                          ГОСТ 9293-74

Водород газообразный из баллона                    ГОСТ 3022-80

Ацетон, осч                                        ГОСТ 2603-79

Вода дистиллированная                              ГОСТ 7602-72

Кальция хлорид                                     ГОСТ 4161-77

Силикагель марки АСК, Е, зернением 0,5 - 1,0 мм,

предварительно промытый хлороводородной кислотой,

разбавленной водой 1:1, затем водой до

отрицательной реакции промывных вод на ионы хлора

(при добавлении раствора азотно-кислого серебра),

высушенный в сушильном шкафу и прокаленный в

муфельной печи при 200 °C в течение 4 ч

Кислота хлороводородная, хч, разбавленная          ГОСТ 3118-77

водой по объему

Вода дистиллированная                              ГОСТ 7602-72

Серебро азотно-кислое, хч

1%-ный водный раствор                              ГОСТ 1277-75

Насадки для хроматографических колонок готовые:

3% OV (0,16 - 0,20 мм) на Инертоне-супер,

Хемапол, Чехия

5% SE-30 (0,16 - 0,20 мм) на Хроматоне

N-AW, Хемапол, Чехия

Бумажные фильтры "синяя лента",                    ТУ 6-09-1705-77

предварительно промытые этанолом

Стекловата

2.2.2. Приборы и оборудование

Аппарат для встряхивания АВУ-6С                    ТУ 64-1-2451-78

или аналогичный

Газовый хроматограф "Цвет" или аналогичный,

снабженный термоионным детектором, с пределом

детектирования по азоту в азобензоле

        -12

1,5 x 10    г/куб. см или другой с аналогичными

или улучшенными характеристиками

Хроматографическая колонка стеклянная длиной

1 или 3 м, внутренним диаметром 2 - 3 мм

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М             ТУ 25-11-917-76

или аналогичный

Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные         ГОСТ 34104-80Е

Воронки химические конические диаметром 34 - 37 мм ГОСТ 25336-82Е

Аспирационное устройство                           ТУ 64-1862-77

Барометр                                           ТУ 2504-1797-75

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2,              ГОСТ 215-73Е

цена деления 1 °C, пределы измерения 0 - 55 °C

Колбы грушевидные со шлифом                        ГОСТ 10394-72

вместимостью 50 и 100 мл

Колбы мерные вместимостью 50 и 100 мл              ГОСТ 1770-74

Эксикатор вакуумный                                ГОСТ 25336-82Е

Шкаф сушильный

Печь муфельная

Цилиндры мерные вместимостью 10 мл                 ГОСТ 1770-74Е

Стаканы химические вместимостью 50 мл              ГОСТ 25336-82Е

Пипетки вместимостью 0,1, 1, 5 и 10 мл             ГОСТ 20292-74Е

Пробирки с пришлифованными пробками                ГОСТ 1770-74Е

вместимостью 10 мл

Стеклянные U-образные трубки высотой

10 - 11 см, внутренним диаметром 4 мм

Воронки химические конусные диаметром 34 - 40 мм   ГОСТ 25336-82Е

Фильтродержатель

Сито с диаметром отверстий 0,5 - 1,0 мм

Стеклянные палочки

 

2.4. Отбор проб

 

2.4.1. Подготовка к отбору проб

Конец стеклянной U-образной трубки уплотняют тампоном из стекловаты, через другой конец трубки с помощью воронки заполняют 1,5 куб. см силикагеля и ее второй конец также уплотняют тампоном из стекловаты. Перед отбором проб заполненные трубки активируют путем нагревания в муфельной печи до 150 - 200 °C и выдерживания при этой температуре в течение 40 - 50 мин. Активированные трубки, закрытые заглушками, можно хранить в эксикаторе под вакуумом не более 10 суток.

2.4.2. Отбор проб

Анализируемый воздух со скоростью 2 л/мин. аспирируют через последовательно соединенные бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель, и трубку с силикагелем.

Фильтры с отобранными пробами, упакованные в полиэтиленовые пакеты, можно хранить в холодильнике при температуре 4 °C не более 5 дней, при температуре 20 °C - 1 месяц.

 

2.5. Подготовка к определению

 

2.5.1. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3% OV-17 на Инертоне-супер) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °C в течение 10 - 12 ч.

2.5.2. Приготовление стандартных растворов

Стандартный раствор Ципродинила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор может храниться в холодильнике не более месяца.

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 и 3,0 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением ацетоном.

Растворы могут храниться в холодильнике в течение 10 дней.

2.5.3. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика в испаритель хроматографа вводят по 3 мкл рабочего стандартного раствора Ципродинила с концентрацией 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 и 3,0 мкг/мл.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят средние значения высот хроматографических пиков для каждой концентрации.

Строят градуировочный график зависимости высоты хроматографического пика, мм, от концентрации Ципродинила в растворе, мкг/мл.

 

2.6. Описание определения

 

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан емкостью 50 мл, заливают 10 мл этанола и оставляют на 10 мин., периодически перемешивая. Растворитель сливают через воронку в грушевидную колбу, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр затем обрабатывают новой порцией этанола объемом 4 - 5 мл.

Силикагель из трубки переносят в пробирку емкостью 10 мл, заливают 3 мл этанола, закрывают пробкой и встряхивают 1,5 - 2 мин. Растворитель также сливают в грушевидную колбу. Операцию повторяют дважды.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 45 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают током теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 мл ацетона и 3 мкл полученного раствора анализируют по п. 2.7.

 

2.7. Условия хроматографирования градуировочных

и анализируемых растворов

 

2.7.1. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый "Цвет-570" с ТИД.

Неподвижная фаза - 3% OV-17 на Инертоне-супер (0,16 - 0,20 мм).

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм.

                                        10

    Рабочая шкала электрометра - 32 x 10   Ом.

Скорость движения ленты самописца - 200 мм/ч.

Температура испарителя - 290 °C, термостата колонки - 220 °C, детектора - 340 °C, переходной камеры - 364 °C.

Газовый режим: азот - 35, водород - 15, воздух - 180 - 200 мл/мин.

Абсолютное время удерживания - 3 мин.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,6 - 9,0 нг.

Объем вводимой пробы - 3 мкл.

2.7.2. Альтернативные условия хроматографирования

Альтернативная фаза: 5% SE-30 на Хроматоне N-AW (0,16 - 0,20 мм), длина колонки 3 м, внутренний диаметр 3 мм.

Температура термостата колонки - 250 °C, детектора - 340 °C, испарителя - 290 °C.

Газовый режим: азот - 30, водород - 13, воздух - 140 мл/мин.

Абсолютное время удерживания - 1 мин. 7 с.

Рабочая шкала электрометра - 32 x 10.

Скорость движения ленты самописца - 200 мм/ч.

Линейный диапазон детектирования - 1,5 - 15 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в испаритель хроматографа 2 - 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 3,0 мкг/мл, разбавляют ацетоном.

 

2.8. Обработка результатов анализов

 

    Концентрацию   Ципродинила  в  воздухе   рассчитывают  методом

абсолютной калибровки по формуле:

 

                               H  x A x V

                                1        1

                          C = -------------,

                              H  x V  x 100

                               0    2

 

    где:

    C - концентрация Ципродинила в воздухе, мг/куб. м;

    H  - высота (площадь) пика образца, мм;

     1

    H  - высота (площадь) пика стандарта, мм;

     0

    A - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

    V  - объем экстракта, подготовленного  для хроматографирования

     1

(мл);

    V   -  объем   пробы   воздуха,   отобранного   для   анализа,

     2

приведенного  к  стандартным  условиям  (давление  760 мм рт. ст.,

температура 20 °C), л.

 

3. Требования техники безопасности

 

Помещение, в котором проводится определение Ципродинила, обязательно должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.

Работу с образцами, стандартами и растворителями следует проводить в вытяжном шкафу с использованием индивидуальных средств защиты.

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

 

4. Разработчики

 

Калинин В.А., профессор, к. с-х. н., Довгилевич Е.В., к. биол. н., Калинина Т.С., к. с-х. н., Довгилевич А.В., к. хим. н.

Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевский пр., 2, кафедра химических средств защиты растений. Телефон: 976-02-20. Факс: 976-43-26.