Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации,

Руководитель Федеральной

службы по надзору в сфере

защиты прав потребителей

и благополучия человека

Г.Г.ОНИЩЕНКО

18 января 2005 года

 

Дата введения:

18 апреля 2005 года

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ПИРАКЛОСТРОБИНА

В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ

ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

МУК 4.1.1950-05

 

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

 

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации пираклостробина в диапазоне 0,05 - 1 мг/куб. м.

Пираклостробин - действующее вещество препарата КАБРИО ТОП, ВДГ, 600 г/кг, фирма-производитель БАСФ АГ, Германия.

Метил N-{2-[1-(4-хлорфенил)-1H-пиразол-3-илоксиметил]фенил}(N-метокси)карбамат (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

    C  H  ClN O .

     19 18   3 4

    Мол. масса 387,8.

    Бесцветное  или  светло-бежевое  кристаллическое  вещество  без запаха.

                                                                         -5

Температура  плавления 63,7 - 65,2 °С. Давление паров при 20 °С: 2,6 х 10

мПа.  Растворимость  в  органических  растворителях  при 20 °С (г/куб. дм):

ацетон  -  более  200; ацетонитрил - более 980; изопропанол - 40; метанол -

140. Растворимость в воде при 20 °С - 1,9 мг/куб. дм.

    Пираклостробин  стабилен  в водной среде при pH 5 - 7 более 30-ти дней,

подвержен  в  воде  фотолизу:  DT    -  менее  2-х  часов.  В  почве период

                                 50

полураспада составляет 2 - 37 дней.

    Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

    Краткая токсикологическая характеристика

    Острая  пероральная  токсичность  (LD  )  для крыс > 5000 мг/кг; острая

                                         50

дермальная токсичность (LD  ) для крыс > 2000 мг/кг.

                          50

Область применения препарата

Пираклостробин - фунгицид из группы стробилуринов контактного и глубинного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и мучнистой настоящей росы. Рекомендуется для борьбы с фитопатогенными грибами на зерновых, овощных и плодовых культурах.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) пираклостробина в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/куб. м.

 

1. Погрешность измерений

 

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (дельта), не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

 

2. Метод измерения

 

Измерения концентраций пираклостробина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование пираклостробина из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят ацетоном.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

 

3. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

 

3.1. Средства измерений

 

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым         Номер Госреестра 15945-97

детектором с переменной длиной волны (фирмы

Perkin-Elmer, США)

Весы аналитические ВЛА-200                        ГОСТ 24104

Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ                 ТУ 25-11-1414-78

(ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург)

или аспирационное устройство ЭА-1

Барометр-анероид М-67                             ТУ 2504-1797-75

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена        ТУ 215-73Е

деления 1 °С, пределы измерения 0 - 55 °С

Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 куб. см      ГОСТ 1770

Пипетки градуированные 2-го класса точности       ГОСТ 29227

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см

Пробирки градуированные вместимостью 5            ГОСТ 1770

или 10 куб. см

Цилиндры мерные 2-го класса точности              ГОСТ 1770

вместимостью 50 и 500 куб. см

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

 

3.2. Реактивы

 

Пираклостробин с содержанием действующего

вещества не менее 99,9% (БАСФ, Германия)

Вода бидистиллированная, деионизированная или     ГОСТ 6709

перегнанная над KMnO

                    4

Кислота уксусная ледяная                          ГОСТ 61-75

Ацетон                                            ГОСТ 2603

Ацетонитрил для хроматографии, хч                 ТУ 6-09-4326-76

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

 

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

 

Бумажные фильтры "синяя лента" обеззоленные       ТУ 6-09-2678-77

Воронки конусные диаметром 30 - 37 мм             ГОСТ 25336

Груша резиновая

Колбы грушевидные на шлифе вместимостью           ГОСТ 10394

100 куб. см

Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм

Насос водоструйный                                ГОСТ 10696

Пробирки центрифужные                             ГОСТ 25336

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М            ТУ 25-11-917-74

или ротационный вакуумный испаритель

В-169 фирмы Buchi, Швейцария

Стаканы химические вместимостью 100 куб. см       ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянные палочки

Набор для фильтрации растворителей через

мембрану

Хроматографическая колонка стальная длиной

25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая

Кромасил 100 С 18, зернением 7 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного

хроматографа вместимостью 50 - 100 куб. мм

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

 

4. Требования безопасности

 

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

 

5. Требования к квалификации операторов

 

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

 

6. Условия измерений

 

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

 

7. Подготовка к выполнению измерений

 

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетона и ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

 

7.1. Очистка растворителей

 

7.1.1. Очистка ацетона

    Ацетон  перегоняют  над  перманганатом  калия  и  поташом (на 1 куб. дм

ацетона 10 г KMnO  и 2 г K CO ).

                 4        2  3

7.1.2. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

 

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

 

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 270 куб. см воды, 1 куб. см ледяной уксусной кислоты, добавляют 730 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

 

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

 

Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

 

7.4. Приготовление градуировочных растворов

 

7.4.1. Исходный раствор пираклостробина для градуировки (концентрация 1 мг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,1 г пираклостробина, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2. Раствор N 1 пираклостробина для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора пираклостробина с концентрацией 1 мг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

7.4.3. Рабочие растворы N 2 - 6 пираклостробина для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0 мкг/куб. см)

В 5 мерных колб вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 2,5; 5,0 и 10,0 куб. см раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией пираклостробина 0,05; 0,1; 0,25; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 10-ти суток.

 

7.5. Отбор проб

 

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

В течение 15 минут последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух аспирируют в течение 5 минут с объемным расходом 1 - 5 куб. дм/мин. через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации пираклостробина на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 1 куб. дм воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4 °С - 7 дней.

 

7.6. Установление градуировочной характеристики

 

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации пираклостробина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки N 2 - 6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика пираклостробина.

7.6.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С 18, зернением 7 мкм

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - уксусная кислота (73:27:0,1, по объему)

Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 276 нм

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм

Ориентировочное время выхода пираклостробина: 6,0 - 6,33 мин.

Линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор пираклостробина с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют ацетонитрилом.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х стандартных растворов различной концентрации. Если значения площади отличаются более чем на 5% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

 

8. Выполнение измерений

 

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 куб. см, заливают 10 куб. см ацетона, оставляют на 4 - 5 минут, периодически перемешивая. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 куб. см.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 10 куб. см ацетонитрила и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.6.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию пираклостробина в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

 

9. Обработка результатов измерений

 

Массовую концентрацию пираклостробина в пробе воздуха рабочей зоны (Х, мг/куб. м) рассчитывают по формуле:

 

                             Х = С х W / V  ,

                                          20

 

    где:

    С   -   концентрация  пираклостробина  в  хроматографируемом  растворе,

найденная  по  градуировочному  графику  в соответствии с величиной площади

хроматографического пика, мкг/куб. см;

    W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

    V    -  объем  пробы  воздуха,  отобранный  для  анализа, приведенный к

     20

стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С) условиям, куб. дм.

 

                     V   = 0,386 х Р х u t / (273 + Т),

                      20

 

где:

Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С;

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации пираклостробина в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

 

10. Оформление результатов измерений

 

                          _

    За результат анализа (Х) принимается среднее арифметическое результатов

                                            _

двух  параллельных  определений  Х   и  Х  (Х = (Х  + Х ) / 2), расхождение

                                  1      2        1    2

между  которыми  не  превышает  значений  норматива  оперативного  контроля

сходимости (d): |Х  - Х | <= d.

                  1    2

 

                                  _

                      d = d     х Х / 100, мг/куб. м,

                           отн.

 

    где:

    d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/куб. м;

    d     - норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 10%).

     отн.

    Результат количественного анализа представляют в виде:

                          _

    -  результат  анализа Х (мг/куб. м), характеристика погрешности дельта,

                _

%, Р = 0,95 или Х +/- ДЕЛЬТА, мг/куб. м, Р = 0,95, где:

 

                                        _

                               дельта х Х

                      ДЕЛЬТА = ----------, мг/куб. м.

                                  100

 

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

 

11. Контроль погрешности измерений

 

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

 

12. Разработчики

 

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.