Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N
4990-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ТРИФУМИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая
характеристика препаратов приведена в Методических указаниях N 5026-89.
Принцип метода. Определение
трифумина и его
метаболитов
основано
на хроматографическом разделении
в тонком слое оксида
алюминия
(пластинки "Алуфол") и обнаружении зон локализации после
термического
разложения препаратов на пластинке до
ароматического
амина;
диазотирования последнего нитритом натрия и азосочетания
образовавшегося
производного фенилдиазония с 1-нафтолом. Возможны
также хроматографирование в
тонком слое силикагеля (пластинки
"Силуфол"
УФ ) и
обнаружение пятен под
хроматоскопом. Для
254
обнаружения трифумина может быть применен
бромфеноловый реагент.
Пробы отбирают с
концентрированием (бумажный
фильтр "синяя
лента").
Метрологическая
характеристика метода. Предел
измерения
трифумина
и его метаболитов
в анализируемом объеме
пробы по
реакции
азосочетания 0,2 мкг
(на пластинках "Алуфол"), 3 мкг
("Силуфол"), под
хроматоскопом 0,5 мкг ("Силуфол" УФ ). Предел
254
измерения
трифумина по реакции
с бромфеноловым реагентом 3 мкг
("Силуфол"). Предел
измерения в воздухе
трифумина и его
метаболитов
0,007 мг/куб. м (при отборе 30 л воздуха). Диапазон
измеряемых
концентраций 0,007 - 2
мг/куб. м. Граница суммарной
погрешности измерения трифумина +/- 13,2%,
метаболита ФМ-6-1 - +/-
14,5, метаболита ФД-1-1 - +/- 14,8%.
Избирательность метода. Трифумин
и его метаболиты разделяются
на
хроматограмме. Определению по
реакции азосочетания мешают
гербициды
из группы фенилмочевины, имеющие близкие величины R .
f
Определению с
бромфеноловым реагентом мешают фосфорорганические и
другие
пестициды, определяемые этим реагентом и имеющие близкие
величины R .
Определению под хроматоскопом могут мешать пестициды
f
и другие коэкстрактивные вещества,
видимые под хроматоскопом в
области
250 - 260
нм и имеющие
близкие к трифумину
и его
метаболитам
величины R . Из трех способов
обнаружения более
f
специфичен способ по реакции азосочетания. Сочетание
трех способов
обнаружения
позволяет надежно идентифицировать трифумин
и его
метаболиты в присутствии пестицидов названных групп.
Время измерения
(включая отбор проб) около 120 мин.
Реактивы и
растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Безводный сульфат натрия ч. Фильтры
бумажные "синяя лента". Нитрит натрия ч.д.а.
Кислота хлороводородная х.ч. Кислота уксусная х.ч. Гидроксид калия ч. 1-Нафтол
ч.д.а. Бромфеноловый синий, индикатор ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а. Стандартные
пластинки "Алуфол", "Силуфол" (20 x 20 см),
"Хемапол". Препарат трифумин. Метаболиты трифумина ФМ-6-1 и
ФД-1-1 х.ч. Основные стандартные растворы трифумина и его метаболитов с
концентрацией по 1000 мкг/мл готовят растворением н-гексаном навески каждого
вещества 25 мг (0,025 г) х.ч. в мерных колбах вместимостью 25 мл. Трифумин в
растворе устойчив при хранении в холодильнике в течение 1 мес., метаболиты - 3
мес. Рабочий стандартный раствор (смесь трифумина и его метаболитов) готовят
внесением 2,5 мл основного стандартного раствора каждого вещества в мерную
колбу на 50 мл и доведением н-гексаном объема раствора до метки. Концентрация
каждого вещества в смеси 50 мкг/мл. Растворы устойчивы в холодильнике в течение
10 дней.
Проявляющие
реагенты:
N 1: а - к смеси из
46 мл воды и 4 мл концентрированной хлороводородной кислоты прибавляют 1 г
нитрита натрия; б - к раствору 2,8 г гидроксида калия в 50 мл воды прибавляют
0,1 г 1-нафтола. Проявляющие реагенты применяют свежеприготовленными.
N 2: а - растворяют
0,05 г бромфенолового синего в 10 мл ацетона и доводят объем раствора до 100 мл
1-процентным водно-ацетоновым (1:3) раствором нитрата серебра; б - 5-процентный
водный раствор уксусной кислоты. Реактивы устойчивы в течение 2 мес.
Приборы и посуда.
Электроаспиратор для отбора проб воздуха. Фильтродержатели. Ротационный
вакуумный испаритель. Баня водяная. Колбы: мерные на 25, 50 и 100 мл;
конические на 100 мл; грушевидные на шлифах вместимостью 50 мл. Стаканы
химические на 50 и 100 мл. Пипетки вместимостью 0,1; 1,5; 10 мл.
Хроматографическая камера. Пульверизаторы стеклянные. Лампа УФ-света
типа "Хроматоскоп" или аналогичная с диапазоном светового излучения
250 - 260 нм.
Отбор проб. Воздух
со скоростью 1 л/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", вложенный
в фильтродержатель. Рекомендуется отбирать три параллельные пробы. Максимально
отбираемый объем воздуха 30 л (в течение 30 мин.). Отобранные пробы хранить в
холодильнике не более 3 дней.
Ход анализа.
Бумажный фильтр помещают в стакан и заливают 20 мл н-гексана (ацетона).
Экстрагируют, перемешивая стеклянной палочкой в течение 5 мин., сливают
растворитель через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки, отжимая
фильтр стеклянной палочкой. Экстракцию повторяют, экстракты объединяют.
Упаривают растворитель под вакуумом на ротационном испарителе (температура бани
45 °C) до объема около 0,3 мл и хроматографируют. При использовании в качестве
экстрагента ацетона остаток экстракта упаривают при комнатной температуре
досуха, растворяют в 0,3 мл н-гексана и хроматографируют.
Определение методом ТСХ.
На пластинку "Алуфол" с помощью
капилляра или
микропипетки наносят пробу, ополаскивая колбу 3 - 4
раза
небольшими количествами (около
0,1 мл) н-гексана. На эту же
пластинку
наносят 0,05 - 0,2
мл рабочего стандартного раствора
смеси
трифумина и его метаболитов. Пластинку хроматографируют в
подвижной
фазе гексан -
ацетон (2:1). После
подъема фронта
растворителя на 10 см пластинку вынимают из камеры,
отмечают линию
фронта и оставляют
на несколько минут на воздухе для
испарения
растворителя.
Затем пластинку помещают
в сушильный шкаф с
температурой
160 - 170
°C и выдерживают в течение 1 ч. После
охлаждения
пластинку помещают в
камеру для опрыскивания
и
опрыскивают проявляющим реагентом N 1: сначала
реактивом а и сразу
же реактивом б. Трифумин
и его метаболиты проявляются в виде
красных
пятен. Величины R
трифумина, ФМ-6-1 и
ФД-1-1
f
соответственно
0,23; 0,49; 0,82.
Для этой реакции можно также
использовать пластинки "Силуфол".
Для обнаружения трифумина и его метаболитов под
хроматоскопом
используют
пластинки
"Силуфол" УФ . В этом
случае пробу с
254
н-гексаном
наносят на пластинку
"Силуфол" УФ . Развивают
254
хроматограмму
в подвижной фазе
гексан - ацетон (2:1), дают
растворителю
испариться с пластинки
и рассматривают ее под
хроматоскопом.
Величины R трифумина,
ФМ-6-1 и ФД-1-1
f
соответственно
0,35; 0,61; 0,93. Далее эту же хроматограмму можно
проявить
бромфеноловым реагентом (реагент
N 2). Сначала
опрыскивают
реактивом а, затем
5 мин. прогревают при 100 °C и
опрыскивают реактивом б. Бромфеноловым реагентом обнаруживается
только трифумин, метаболиты не обнаруживаются.
Количественное
определение трифумина и его метаболитов проводят путем сравнения интенсивности
окраски и размера пятен пробы с пятнами стандартных растворов на одной
пластинке. Площадь пятна измеряют планиметром или с помощью промасленной
миллиметровой бумаги. Прямая пропорциональная зависимость площади пятен от
концентрации препаратов наблюдается в пределах 0,2 - 15 мкг (проявляющий
реагент N 1), 0,5 - 20 мкг (обнаружение под хроматоскопом), 3 - 25 мкг
(проявляющий реагент N 2). При больших концентрациях анализируют аликвотную
часть экстракта (0,1 - 0,2 мл) параллельной пробы.
Обработка
результатов анализа. Концентрацию трифумина в воздухе (X, мг/куб. м) вычисляют
по формуле:
GV
2
X = -----,
V V
1 20
где:
G -
количество пестицида в
хроматографируемом объеме пробы,
мкг;
V - объем пробы, взятый для
хроматографирования, мл;
1
V - общий объем пробы, мл;
2
V -
объем воздуха, отобранный для
анализа и приведенный к
20
стандартным условиям, л.
Требования
безопасности. Следует соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работы
с органическими растворителями, кислотами и щелочами.