Утверждены
Министерством
здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N
6190-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ГЛУФОСИНАТА АММОНИЯ (БАСТА)
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие
Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические
указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов
при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями
растений и сорняками.
1. Краткая характеристика
препарата
Глуфосинат аммоний
(баста) - DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфонат аммония
(по номенклатуре ИЮПАК).
┌ O NH
┐-
│ │ │ 2 │
+ C H N O P.
│CH
P-CH -CH -CH-COOH│ NH 5 15 2 4
│ 3\\ 2
2 │ 4
└ O ┘ М.м. 198,2.
Фирменное название
- XOE 039866.
Белое
кристаллическое вещество, температура плавления 215 °C (разлагается). Растворим
в воде, нерастворим в органических растворителях. При
применении может находиться в виде аэрозоля.
ОБУВ в воздухе
рабочей зоны 0,04 мг/куб. м.
2.
Характеристика метода
Определение
основано на анализе препарата методом реакционной газожидкостной хроматографии
(ГЖХ) на неподвижной фазе OV-17 с термоионным (ТИД) или
пламенно-фотометрическим фосфорным (ПФД) детектором или на хроматографировании
в тонком слое (ТСХ) пластинок "Силуфол" с обнаружением баста по реакции с нингидрином.
Отбор проб
проводится с концентрированием (фильтр "синяя лента", поглотитель с
водой).
Предел измерения в
анализируемом объеме пробы методом ГЖХ - 0,5 нг, методом ТСХ - 0,1 мкг.
Предел измерения в
воздухе (при отборе 125 л воздуха): ГЖХ - 0,02 мг/куб. м, ТСХ - 0,08 мг/куб. м.
Диапазон измеряемых
концентраций: 0,02 мг/куб. м - 4 мг/куб. м.
Определению как
методом ГЖХ, так и ТСХ может мешать гербицид глифосат. Однако совместное
применение баста и глифосата в технологиях защиты
исключено.
Другие фосфор- и
азотсодержащие соединения определению баста методом
ГЖХ не мешают; определению методом ТСХ могут мешать соединения, содержащие
аминогруппу. Границы суммарной погрешности измерения методом ГЖХ +/- 15,7%,
методом ТСХ +/- 18,5%.
3.
Реактивы, растворы, материалы
Общие для ТСХ и ГЖХ
Фильтры "синяя
лента".
Дистиллированная
вода.
Аммиак водный 25%
ч, ГОСТ 3760-79.
Метиловый спирт хч,
ГОСТ 6996-77.
Глуфосинат аммония
99%.
Основной
стандартный раствор баста (ОСР): 100 мг баста
растворяют в 100 мл 1-процентного водного раствора аммиака. Хранить в
холодильнике не более 3-х месяцев.
К методу ТСХ
Этанол 96%, ТУ
6-09-17-10-77.
Медь сернокислая
чда, ГОСТ 4165-78, прокаленная при 160 °C до светло-голубого цвета.
Пластинки
"Силуфол", Хемапол, Чехословакия, или отечественные
"Армсорб".
Рабочие стандартные
растворы глуфосинат аммония:
"а"
- 100 мкг/мл - готовят разведением ОСР 1-процентным водным раствором аммиака,
хранят в холодильнике не более 2-х недель; раствор "б" - 10 мкг/мл -
готовят разведением раствора "а" и раствор "в" - 1 мкг/мл -
разведением раствора "б" этанолом в день проведения исследований.
Проявляющий
реагент: 2-процентный раствор нингидрина в ацетоне. Хранить в темной склянке.
К методу ГЖХ
Неподвижная фаза 3%
OV-17 на Хроматоне N-AW-DMCS.
Азот газообразный
особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Водород в баллоне,
ГОСТ 3022-88.
Толуол чда, ГОСТ
5789-78.
Этилацетат хч, ГОСТ
22300-81.
Уксусная кислота
ледяная, ГОСТ 18270-81.
Триметилортоацетат
хч.
Рабочие стандартные
растворы глуфосинат аммония: "а" - 40 мкг/мл, "б" - 20
мкг/мл, "в" - 10 мкг/мл готовят разведением ОСР 1-процентным водным
раствором аммиака. Для получения хроматографируемых производных берут по 0,1 мл
каждого стандарта, упаривают досуха при комнатной температуре и далее
поступают, как описано в разделе получения хроматографируемых производных в
образце. Концентрация полученных производных глуфосинат аммония в 2 мл
метанола: из "а" - 2 мкг/мл, "б" - 1 мкг/мл, "в"
- 0,5 мкг/мл.
4. Приборы,
аппаратура и посуда
Электроаспиратор
для отбора проб воздуха, ТУ 64-1-862-82.
Фильтродержатели.
Поглотители
Рыхтера.
Аппарат для
встряхивания колб типа АВУ-60, ТУ 64-1-2451-78.
Весы аналитические
ВЛА-200М.
Колбы конические
широкогорлые или стаканы емкостью 100 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные, ГОСТ
1770-74, емкостью 50, 100 мл.
Цилиндры мерные,
ГОСТ 1770-74.
Пипетки мерные,
ГОСТ 20292-74.
К методу ТСХ
Камера
хроматографическая, ГОСТ 25336-82.
Пульверизатор стеклянный,
ГОСТ 25336-82.
Камера для
опрыскивания - колпак для насосов с кнопкой и рантом диаметром 160 мм, высотой
220 мм, ТУ 25-11-1022-75.
К методу ГЖХ
Газовый хроматограф
серии "Цвет" или аналогичный с ТИД или ПФД-фосфорным.
Колбонагреватели
для круглодонных колб (50 мл) или электроплитка с закрытой спиралью.
Ротационный
вакуумный испаритель типа ИР-1М, ТУ 20-11-917-74, или аналогичный.
Баня водяная, ТУ
64-1-2850-76, или аналогичная.
Холодильники Либиха
200 - 400 мм, ГОСТ 25336-82.
Колбы грушевидные,
ГОСТ 25336-82, емкостью 50, 100 мл.
Пробирки мерные,
ГОСТ 1770-74, емкостью 5, 10 мл.
Микрошприцы на 10
мкл.
Колонка стеклянная,
длина 1 м, диаметр 3,5 см.
Секундомер.
5. Отбор
проб воздуха
Воздух со скоростью
5 л/мин. аспирируют через помещенный в фильтродержатель бумажный фильтр
"синяя лента" или через поглотительный прибор Рыхтера, заполненный 10
мл дистиллированной воды, в течение 25 мин. Длительность хранения пробы в
холодильнике не более 2-х суток.
6.
Подготовка к измерению
Бумажный фильтр из
фильтродержателя переносят в коническую колбу и заливают 10 мл дистиллированной
воды. Экстрагируют пестицид из фильтра в течение 30 мин. на аппарате для
встряхивания. Экстракт сливают в мерную пробирку, доводят объем точно до 10 мл.
При отборе в поглотитель Рыхтера воду сливают в мерную пробирку и доводят объем
точно до 10 мл.
7.
Проведение измерения методом ТСХ
Из полученных 10 мл водного экстракта отбирают 1
мл, прибавляют к нему
1 мл этанола
и 1,2 г (~ 1 мл) прокаленной сернокислой
меди, перемешивают,
дают
отстояться и аликвоту
0,1 - 0,2 мл наносят на хроматографическую
пластинку
микропипеткой (шприцем) или пипеточным дозатором. Справа и слева
от
пробы наносят 0,2
мл рабочего стандартного
раствора "в", что
соответствует
0,2 мкг, и 0,1 мл
рабочего стандартного раствора "б", что
соответствует
1 мкг. Пластинку при нанесении проб и стандартов для более
быстрого
испарения растворителя можно
подогреть на электрогрелке. Когда
растворитель
(в пятне) испарится, пластинку
помещают в хроматографическую
камеру,
в которую налита смесь метанол - аммиак (7:3). Дают
растворителю
подняться
на 10 см от старта и вынимают пластинку из камеры.
Помещают ее
под УФ-свет на 25 минут,
располагая на расстоянии 20 см от источника света.
После облучения опрыскивают пластинку проявляющим
реагентом и помещают на 1
мин. в
сушильный шкаф при температуре 40 °C. Вынимают из шкафа и оставляют
при
комнатной температуре (исключить прямое попадание солнечного
света).
Через 5 -
7 минут глуфосинат
аммоний проявляется в
виде пятен
сиренево-красного цвета, R = 0,7 +/- 0,05.
f
Количество
препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площадей пятен
пробы и стандартов. Прямопропорциональная зависимость между концентрацией и
площадью пятна (при одинаковых нанесенных объемах) соблюдается в интервале 0,1
- 5 мкг. Если содержание препарата в пробе превышает верхнюю границу диапазона
(5 мкг), для хроматографирования необходимо брать аликвоту (0,1; 0,2 мл)
экстракта (из 10 мл).
Концентрацию
препарата в воздухе X, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:
G x V
X = --------,
V x V
1 20
где:
G - количество препарата, найденное в
хроматографируемом объеме пробы,
мкг;
V - объем пробы, нанесенный на пластинку, мл;
1
V - общий
объем пробы (экстракта), мл;
V - объем воздуха, отобранный для анализа и
приведенный к стандартным
20
условиям, л.
Метод ГЖХ
Полученный экстракт
(10 мл) переносят в круглодонную колбу емкостью 50 мл и упаривают под вакуумом
на роторном испарителе при температуре бани не более 50 °C досуха. Прибавляют
для удаления остаточной воды 3 - 5 мл этилацетата и испаряют еще раз досуха.
Получение
хроматографируемых производных
К сухому остатку
прибавляют 2 мл ледяной уксусной кислоты и встряхивают 15 мин. Затем прибавляют
8 мл триметилортоацетата, интенсивно встряхивают и нагревают с обратным
холодильником в течение 4-х часов на колбонагревателе (электроплитке или
песчаной бане), периодически встряхивая колбу вместе с холодильником. По
окончании прибор снимают с нагревателя, добавляют в колбу трижды по 15 мл
толуола и испаряют его каждый раз под вакуумом при температуре бани не более 50
°C до 0,5 - 1 мл (до удаления запаха уксусной кислоты). К остатку прибавляют 5
мл метанола, перемешивают и упаривают растворитель до 1 - 1,5 мл, переносят в
мерную пробирку, доводят точно до 10 мл и анализируют методом ГЖХ. Одновременно
с пробами метоксилируют стандартные рабочие растворы для ГЖХ ("а",
"б", "в").
Измерение методом
ГЖХ проводится на хроматографе с ТИД или ПФД-фосфорным:
- колонка
стеклянная, длина 1 м, диаметр 3,5 мм;
- фаза 3% OV-17 на
хроматоне N-AW-DMCS.
Условия анализа ТИД ПФД-фосфорный
газ-носитель (азот) 23 мл/мин. 30 мл/мин.
водород 14 - 17
мл/мин. 70 мл/мин.
воздух 400 мл/мин. 100 мл/мин.
Температура ввода 225 °C 225 °C
детектора - 225 °C
колонки 220 °C 220 °C
Вводимый объем 2 - 3 мкл 2 - 3 мкл
Время удерживания 3,25 мин. 1,5 мин.
Концентрацию
глуфосинат аммония (баста) (X, мг/куб. м) в воздухе
рассчитывают по формуле:
C x V
x H x V
ст ст пр
X =
-------------------,
H x V x
V
ст 1
20
где:
C - концентрация стандартного раствора
производного баста, введенного
ст
в хроматограф, мкг/мл;
V -
объем стандартного раствора
производного баста, введенного в
ст
хроматограф, мкл;
H -
высота пика хроматографируемого объема пробы, мм;
пр
V - общий
объем пробы, мл;
H - высота пика хроматографируемого объема
стандарта, мм;
ст
V - хроматографируемый объем пробы, мкл;
1
V - объем воздуха, отобранный для анализа и
приведенный к нормальным
20
условиям, л.
8.
Требования безопасности
Выполняются в
соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при
работе в лабораториях (отделениях, отделах) санэпидучреждений системы МЗ
СССР", N 2455-81 от 20.10.81.