Утверждены
Министерством
здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N
6192-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ДИМЕТОМОРФА (АКРОБАТА)
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие
Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические
указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов
при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с
вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Диметоморф (акробат) - экспериментальный фунгицид, предназначенный для борьбы с
фитофторой.
CH O OCH
3 \
─── / 3
// \\
\ ___
/ O
─── C H ClNO .
─── \
\\ / \ 21 22 4
\C=CH-C-N O
/ \ / М.м.
287,9.
─── /
───
// \\
\ ___
/
/
───
Cl
Химическое название -
(E,Z)-3/3-(4-хлорофенил)-3-(3,4-
диметоксифенил)акрилоил/морфолин.
Бесцветное твердое кристаллическое вещество,
без запаха, реакции
изомеризации
происходят в различных
растворителях под влиянием света.
Температура плавления 127 - 148 °C. Легко растворим
в ацетоне, ацетонитриле
и метаноле, плохо растворим в гексане
- 0,122 г/л и воде
- 0,050 г/л.
Препарат малотоксичен.
ЛД для мышей -
3700 мг/кг, а
для крыс - 3900
50
мг/кг, не оказывает кожно-раздражающего действия.
2.
Характеристика метода
Метод основан на
использовании газожидкостной хроматографии с применением детектора по захвату
электронов (ДЭЗ) или тонкослойной хроматографии.
Отбор проб
производится с концентрированием на бумажном фильтре "синяя лента".
Нижний предел
измерения в хроматографируемом объеме - 0,5 нг (ГЖХ), 1 мкг (ТСХ).
Нижний предел
измерения в воздухе - 0,001 мг/куб. м (ГЖХ), 0,05 мг/куб. м (ТСХ) при отборе
150 л воздуха.
Диапазон измеряемых
концентраций: 0,001 - 0,04 (ГЖХ), 0,05 - 0,25 (ТСХ).
Измерению не мешают
другие фунгициды.
Суммарная
погрешность измерения не превышает +/- 20,0% (ГЖХ) и +/- 25% (ТСХ).
3.
Реактивы, растворы и материалы
Диметоморф, 95,6-процентный препарат.
Стандартный раствор
диметоморфа с концентрацией 100 мг/мл готовят
растворением 10,5 мг препарата в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят
в холодильнике. Годен к употреблению в течение 30
дней.
Рабочие растворы диметоморфа концентрации 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл
готовят в градуированных пробирках вместимостью 10 мл соответствующим
разбавлением ацетоном стандартного раствора. Хранят рабочие растворы диметоморфа в холодильнике. Годен
к употреблению в течение 1 - 3 дней.
Натрия сульфат
безводный хч, ГОСТ 4166-76.
Ацетон ч, ГОСТ 2603-79.
Гексан ч, ТУ 6-06-3375-78.
Азот газообразный,
ГОСТ 9283-74, в баллоне с редуктором.
Аммиак
25-процентный, ГОСТ 3760-74.
Бромфеноловый синий чда, ТУ
6-99-3719-83.
Кислота лимонная хч, ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.
Кислота уксусная хч, ГОСТ 18290-75, 5-процентный водный раствор.
Серебро
азотнокислое чда, ГОСТ 1277-81.
Проявляющий реагент
1:
смесь растворов бромфенолового синего (БФС) и азотнокислого серебра.
Готовят два раствора: 1. 0,5% водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого
серебра. 2. 10 мл 0,05-процентного раствора бромфенолового
синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят
проявляющий реактив в темном прохладном месте. Годен к
употреблению в течение 3 - 5 дней.
Проявляющий реагент
2:
растворяют 0,5 г AgNO в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 5 -
7
3
мл аммиака и доводят ацетоном до 100 мл. Хранят в
темном месте.
Фильтры бумажные обеззоленные "синяя лента", диаметр 5 - 6 см, ТУ
6-09-1678-77.
Хромосорб 750 с 3% OV-17.
4. Приборы
и посуда
Газовый хроматограф
с детектором по захвату электронов.
Весы аналитические
ВЛА-200М.
Испаритель
ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Холодильник
бытовой.
Шкаф электрический
сушильный, ТУ 64-1-1411-72.
Баня водяная, ТУ
64-1-2850-76.
Вакуумный
водоструйный насос, ГОСТ 25336-82.
Колбы грушевидные,
ГОСТ 25336-82, вместимостью 50 - 100 мл (для отгонки растворителя).
Холодильник, ГОСТ
25336-82.
Колбы мерные,
цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.
Воронки
лабораторные, диаметр 5 - 6 см, ГОСТ 25336-82.
Пипетки, ГОСТ
20292-74, на 1; 5; 10 мл.
Воронки
делительные, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.
Микропипетки, ГОСТ
20292-74, на 0,1; 0,2.
Пульверизатор
стеклянный, ГОСТ 25336-82.
Скальпель.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.
Камера для
опрыскивания пластинок, ТУ 25-11-430-70.
Колба с тубусом,
ГОСТ 25336-82.
Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-80.
Секундомер, ГОСТ
5072-79.
Аспирационное
устройство, ТУ 64-1-862-77.
Фильтродержатель.
УФ-лампа типа ПРК-4
или аналогичная.
5. Отбор
пробы воздуха
Воздух со скоростью
5 л/мин. аспирируют через бумажный фильтр "синяя
лента", закрепленный в фильтродержателе.
Продолжительность отбора пробы - 30 мин. Длительность хранения проб в
стеклянной таре в затемненном от света месте не более 5 суток.
6.
Подготовка к измерению
Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую
камеру, содержащую смесь растворителей ацетон - 25% аммиак в соотношении 7:3
(об./об.), глубина погружения
пластинки в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя
до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до
испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению.
7.
Проведение измерения
Бумажный фильтр,
содержащий диметоморф (акробат), из фильтродержателя переносят в делительную воронку и заливают
15 - 20 мл ацетона. Экстрагируют пестицид из фильтра в течение 10 - 15 мин.,
периодически перемешивая содержимое емкости. Экстракцию повторяют дважды
свежими порциями ацетона, экстракты объединяют, отгоняют на ротационном
испарителе досуха при температуре бани не выше 55 °C. К сухому остатку пипеткой
добавляют 1,5 мл ацетона.
8. Метод
ТСХ
0,2 мл полученного
раствора наносят микропипеткой на очищенную пластинку "Силуфол".
Рядом с пробой наносят по 0,2 мл каждого рабочего раствора диметоморфа,
что соответствует содержанию в пятне 0,5; 1,0; 2,0 мкг препарата.
Пластинку
помещают в хроматографическую камеру, куда за 10 - 15
мин. до
хроматографирования наливают
смесь растворителей гексан - ацетон (1:1) в
таком количестве,
чтобы глубина погружения
пластинки в растворители
составляла
0,5 см. После подъема фронта растворителей от линии старта на
высоту
10 см хроматографирование прекращают.
Пластинку выдерживают в
вытяжном
шкафу до испарения
растворителей и обрабатывают
одним из
проявляющих
реагентов. При обработке
азотнокислым серебром (проявляющий
реагент 2)
пластинку орошают до влажного состояния, выдерживают в вытяжном
шкафу
15 - 20
мин. (до исчезновения
запаха аммиака) и
подвергают
УФ-облучению в течение 10 -
15 мин. (нефильтрованные УФ-лучи, лампа ПРК-4).
Пластинку
помещают на расстоянии 20
см от источника света. При
наличии
диметоморфа на хроматограмме
проявляются пятна серо-черного цвета. После
обработки
пластинки бромфеноловым реагентом
(проявляющий реагент 2)
пластинку
опрыскивают раствором лимонной (или уксусной) кислоты. О наличии
диметоморфа в пробе
свидетельствует появление в этом случае синего пятна на
желтом фоне. Величина
R = 0,5 +/- 0,2.
f
9. Метод
ГЖХ
Детектор постоянной
скорости рекомбинации.
Колонка стеклянная
- 1000 x 3 мм.
Твердый носитель -
Хромосорб-750.
Жидкая фаза - 3%
OV-17.
Температура термостата колонки - 185 °C,
детектора - 250 °C,
испарителя - 200 °C.
Газ-носитель - азот
особой чистоты.
Скорость движения
диаграммной ленты - 60 мм/мин.
Скорость потока
азота через колонку - 60 мл/мин.
Скорость потока
через детектор - 150 мл/мин.
-12
Рабочая
шкала электрометра - 20 x 10 .
Время удерживания -
7 мин. 30 сек.
Объем вводимой
пробы - 3 - 5 мкл.
Линейность
детектирования 0,5 - 20,0 мкг.
10. Расчет
концентрации
Концентрацию диметоморфа в мг/куб. м в воздухе вычисляют по формуле:
Тонкослойная
хроматография:
G x V
X = ---------,
0,2 x V
20
где:
G - количество диметоморфа
в пятне пробы, найденное путем сравнения со
стандартами, мкг;
V -
окончательный объем экстракта пробы, мл;
0,2 -
объем экстракта пробы, нанесенный на пластинку, мл;
V -
объем пробы воздуха,
отобранный для анализа и
приведенный к
20
нормальным условиям, л.
Газожидкостное хроматографирование:
C x S
x V x V
ст пр 1 ст
X = --------------------,
S x V x
V
ст пр 20
где:
S - площадь пика анализируемой пробы, кв. мм;
пр
S - площадь пика стандарта, кв. мм;
ст
C -
содержание диметоморфа в стандарте, мкг/мл;
V - объем стандартного раствора, введенного в
хроматограф, мкл;
ст
V - объем хроматографируемой
пробы, введенной в хроматограф, мкл;
пр
V - общий объем пробы, мл;
1
V - объем воздуха, отобранный для анализа и
приведенный к стандартным
20
условиям, л.
11.
Требования безопасности
Соблюдать все
необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а
также Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии,
противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях
(отделах, отделениях) санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР,
N 2455-81 от 20.10.81.