Утверждаю
Заместитель
Главного
государственного
санитарного врача
СССР
М.И.НАРКЕВИЧ
10 октября 1991 г.
N 5974-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ФОТОМЕТРИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ
КАНАМИЦИНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
Представляет собой
комплекс антибиотиков канамицина А,
В, С, основным из которых является канамицин А (90%).
HOH C
O
CH -NH 2│_____/
│ 2 2
/ \
│_____ / NH
\
/ \
\ │ 2 /│
/ \
\│_____/ │
│\ OH /\ O
х 1,7H SO .
│ \│_____/ \ _____/ 2
4
HO O /│ \
\/
OH \
\ /│
\ _____/ NH
│ 2
NH
2
1 1
Канамицин
А - 4,6-диамино-2-гидрокси-1,3-циклогексен-3,6 -диамино-3,6
(дидеокси-альфа-Д-глюкозид)
сульфат. Порошок или
пористая масса белого
цвета, без запаха и вкуса, гигроскопичен.
Хорошо растворим в
воде (645 -
770 мг/мл), практически
нерастворим в 95%
спирте, эфире, хлороформе.
Стабилен в твердом
состоянии и в растворах. Температура плавления 250 °С.
В воздухе находится
в виде аэрозоля.
Обладает ото- и нефротоксическим действием. Слабый аллерген.
ПДК в воздухе - 0,1
мг/куб. м.
Характеристика
метода
Определение
основано на измерении оптической плотности окрашенного в желтый цвет дигидролютидинового производного, образующегося в
результате конденсации аминогруппы молекулы канамицина
с ацетил-ацетоном и формальдегидом при 343 нм.
Отбор проб
производится с концентрированием на фильтр.
Нижний предел
измерения содержания вещества в анализируемом объеме раствора 5 мкг.
Нижний предел
измерения содержания вещества в воздухе - 0,05 мг/куб. м (при отборе 200 л
воздуха).
Диапазон измеряемых
концентраций в воздухе от 0,05 до 1,0 мг/куб. м.
Определению не
мешает присутствие стрептомицина. Мешает присутствие гентамицина, мономицина, сизомицина, неомицина, амикацина, тобрамицина, апрамицина.
Суммарная
погрешность измерения не превышает 10%.
Время проведения
измерения, включая отбор проб, 60 минут.
Приборы,
аппаратура, посуда
Спектрофотометр.
pH-метр.
Аспирационное
устройство.
Фильтродержатели, ТУ 95.72-0577.
Водяная баня.
Секундомер, ГОСТ
5072-79.
Колбы мерные, ГОСТ
1770-74, вместимостью 50, 100, 500 и 1000 мл.
Пробирки с
пришлифованными пробками, ГОСТ 10515-75, вместимостью 10 мл.
Цилиндры мерные,
ГОСТ 1770-74, вместимостью 50 мл.
Пипетки, ГОСТ
20292-74, вместимостью 1, 2, 5 мл.
Стаканы химические,
ГОСТ 19908-85, вместимостью 50 мл.
Воронки с пористой
пластинкой N 1-ПС-1.
Насос водоструйный.
Реактивы,
растворы, материалы
Канамицин.
Ацетил-ацетон, ГОСТ 10259-78, ч.д.а., перегнанный при
135,5 - 138 °С.
Формалин, ГОСТ
1625-75, 30% раствор в воде.
Кислота фосфорная, конц., ГОСТ 5653-75, х.ч.
Кислота уксусная,
ледяная, ГОСТ 61-75, х.ч.
Кислота борная,
ГОСТ 9656-75, ч.д.а.
Смесь фосфорной,
уксусной и борной кислот (раствор А) готовят в мерной колбе на 1000 мл, помещая
последовательно такие количества перечисленных кислот, чтобы содержание каждой
составляло 0,2 М концентрацию, и доводят до метки водой.
Натрия гидроксид,
ГОСТ 4328-77, х.ч., 1,0 М раствор (раствор Б).
Буферная смесь pH 2,56, готовят смешивая 1000 мл раствора А с 150 мл раствора Б.
Реактив С: к 50 мл буферной смеси добавляют 4,0 мл ацетилацетона,
10,0 мл раствора формальдегида, перемешивают, доводят до 150 мл буферной
смесью. Устойчив 7 дней.
Стандартный раствор
N 1 с концентрацией канамицина 50 мкг/мл готовят растворяя точную навеску стандартного образца
антибиотика в воде. Раствор устойчив 2 недели.
Фильтры АФА-ВП-20.
Отбор пробы
воздуха
Воздух с объемным
расходом 20 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20.
Для измерения 1/2 ПДК следует отобрать 200 л воздуха. Срок хранения отобранных
проб 1 месяц.
Подготовка
к измерению
Градуировочные растворы (устойчивы 2 часа) готовят согласно таблице 29.
Таблица 29
ШКАЛА
ГРАДУИРОВОЧНЫХ РАСТВОРОВ
┌─────────┬───────────┬──────────────┬───────────────────────────┐
│ N
│Стандартный│Дистиллирован-│ Содержание канамицина
в │
│стандарта│раствор, мл│ная
вода, мл │анализируемом растворе,
мкг│
├─────────┼───────────┼──────────────┼───────────────────────────┤
│1 │0 │2,5 │0 │
│2 │0,1 │2,4 │5 │
│3 │0,5 │2,0 │25 │
│4 │1,0 │1,5 │50 │
│5 │1,5 │1,0 │75 │
│6 │2,0 │0,5 │100 │
└─────────┴───────────┴──────────────┴───────────────────────────┘
Во все пробирки
шкалы добавляют по 2,5 мл реактива С и нагревают в
кипящей водяной бане 15 минут, охлаждают при комнатной температуре. Измеряют на
спектрофотометре оптическую плотность растворов при длине волны 343 нм. Измерения проводят в кюветах с толщиной поглощающего
слоя 10 мм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого
вещества (раствор N 1 по таблице).
Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения
оптических плотностей градуировочных растворов, на
ось абсцисс - соответствующие им величины содержания вещества в градуировочных растворах (в мкг).
Проверку градуировочного графика проводят 1 раз в 3 месяца или в
случае использования новой партии реактивов.
Проведение
измерения
Фильтр с отобранной
пробой помещают в химический стакан, заливают 5 мл дистиллированной воды,
выдерживают при перемешивании 15 - 20 минут. При необходимости раствор
фильтруют через воронку с пористой пластинкой. Для анализа в пробирку с
пришлифованной пробкой отбирают 2,5 мл раствора антибиотика и обрабатывают
аналогично градуировочным растворам. Оптическую плотность полученного анализируемого раствора измеряют
по отношению к контрольному, который готовят одновременно и аналогично пробам.
Количественное
измерение содержания канамицина в мкг во взятой аликвоте проводят по
предварительно построенному градуировочному графику.
Расчет
концентрации
Концентрацию канамицина "С" в воздухе (в мг/куб. м) вычисляют
по формуле:
С = (а х в) / (б х
V),
где:
а - содержание канамицина в анализируемом объеме раствора пробы, найденное
по градуировочному графику, мкг;
б - объем раствора пробы, взятый для анализа, мл:
в - общий объем
раствора пробы, мл;
V - объем воздуха
(в л), отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям (см.
Приложение 1).
Приложение 1
Справочное
Приведение объема
воздуха к условиям по ГОСТ 12.1.016-79 (температура 20 °С,
давление 760 мм рт. ст.) проводят по следующей формуле:
V х (273 + 20) х Р
t
С = -------------------,
(273 + t°) х
101,33
где:
V - объем воздуха, отобранный для анализа, л;
t
Р - барометрическое давление, кПа; (101,33 кПа = 760 мм рт.
ст.);
t° -
температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
Для удобства
расчета V следует
пользоваться таблицей коэффициентов
(Приложение
2). Для приведения
объема воздуха к температуре 20 °С
и к
давлению 760 мм рт. ст. надо умножить V на соответствующий коэффициент.
t
Приложение
2
Справочное
КОЭФФИЦИЕНТ
К
ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ
ОБЪЕМА ВОЗДУХА К УСЛОВИЯМ
ПО ГОСТ 12.1.016-79
┌───┬─────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│°С
│ Давление Р, кПа (мм рт. ст.)
│
│
├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┤
│ │97,33 │97,86 │ 98,4
│98,93 │99,46 │ 100
│100,53│101,06│101,33│101,86│
│ │(730) │(734) │(738)
│(742) │(746) │(750) │(754) │(758) │(760)
│(764) │
├───┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│-30│1,1582│1,1646│1,1709│1,1772│1,1836│1,1899│1,1963│1,2026│1,2058│1,2122│
│-26│1,1393│1,1456│1,1519│1,1581│1,1644│1,1705│1,1763│1,1831│1,1862│1,1925│
│-22│1,1212│1,1274│1,1336│1,1396│1,1458│1,1519│1,1581│1,1643│1,1673│1,1735│
│-18│1,1036│1,1097│1,1159│1,1218│1,1278│1,1338│1,1399│1,1460│1,1490│1,1551│
│-14│1,0866│1,0926│1,0986│1,1045│1,1105│1,1164│1,1224│1,1284│1,1313│1,1373│
│-10│1,0701│1,0760│1,0819│1,0877│1,0986│1,0994│1,1053│1,1112│1,1141│1,1200│
│-06│1,0640│1,0599│1,0657│1,0714│1,0772│1,0829│1,0887│1,0945│1,0974│1,1032│
│-02│1,0385│1,0442│1,0499│1,0556│1,0613│1,0669│1,0726│1,0784│1,0812│1,0869│
│0
│1,0309│1,0366│1,0423│1,0477│1,0535│1,0591│1,0648│1,0705│1,0733│1,0789│
│+02│1,0234│1,0291│1,0347│1,0402│1,0459│1,0514│1,0571│1,0627│1,0655│1,0712│
│+06│1,0087│1,0143│1,0198│1,0253│1,0309│1,0363│1,0419│1,0475│1,0502│1,0557│
│+10│0,9944│0,9990│1,0054│1,0108│1,0162│1,0216│1,0272│1,0326│1,0353│1,0407│
│+14│0,9806│0,9860│0,9914│0,9967│1,0027│1,0074│1,0128│1,0183│1,0209│1,0263│
│+18│0,9671│0,9725│0,9778│0,9880│0,9884│0,9936│0,9989│1,0043│1,0069│1,0122│
│+20│0,9605│0,9658│0,9711│0,9783│0,9816│0,9868│0,9921│0,9974│1,0000│1,0053│
│+22│0,9539│0,9592│0,9645│0,9696│0,9749│0,9800│0,9853│0,9906│0,9932│0,9985│
│+24│0,9475│0,9527│0,9579│0,9631│0,9683│0,9735│0,9787│0,9839│0,9865│0,9917│
│+26│0,9412│0,9464│0,9516│0,9566│0,9618│0,9669│0,9721│0,9773│0,9755│0,9851│
│+28│0,9349│0,9401│0,9453│0,9503│0,9955│0,9605│0,9657│0,9708│0,9734│0,9785│
│+30│0,9288│0,9339│0,9391│0,9440│0,9432│0,9542│0,9594│0,9646│0,9670│0,9723│
│+34│0,9167│0,9218│0,9268│0,9318│0,9368│0,9418│0,9468│0,9519│0,9544│0,9595│
│+38│0,9049│0,9099│0,9149│0,9198│0,9248│0,9297│0,9347│0,9397│0,9421│0,9471│
└───┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┘