Утверждаю
Главный
государственный
санитарный врач
Российской
федерации,
Первый заместитель
Министра
здравоохранения
Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
20 сентября 2001
года
Дата введения:
с момента
утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ
ПРЕПАРАТА ЭМ-1 "БАЙКАЛ" ПО ОДНОМУ ИЗ ВЕДУЩИХ
КОМПОНЕНТОВ
(LACTOBACILLUS CASEI-21) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.1071-01
1. Разработаны
к.м.н. Сергеюк Н.П. (Научно-исследовательский центр
"Экос").
2. Утверждены и
введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской
Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации
20 сентября 2001 г.
3. Введены впервые.
1. Общие
положения и область применения
Настоящие
методические указания устанавливают методику проведения
микробиологического количественного анализа концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегося ведущим компонентом
консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1 "Байкал") в воздухе
рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м
воздуха.
Методические
указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля
концентрации препарата "Байкал ЭМ-1" по одному из ведущих компонентов
Lactobacillus casei-21 в воздухе рабочей зоны и
производственных помещений и оценки соответствия уровня его содержания
гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88
"ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические
требования", ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ. Методики
выполнения измерений".
Методические
указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий
биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий,
научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей
среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения
микробиологических исследований.
2.
Характеристика штамма Lactobacillus casei-21
Семейство: Lactobacillaceae
Род: Lactobacillus
Вид: casei
Штамм: 21.
На поверхности
плотных питательных сред образует мелкие круглые колонии. Глубинные колонии -
вогнутые, иногда с выростами. Форма клеток - палочки разной длины, образуют
короткие и длинные цепочки, неподвижные, неспорообразующие,
грамположительные. Отмечена также тенденция к образованию заметно искривленных
(изогнутых) клеток.
3. Пределы
измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток
Lactobacillus casei-21 в воздушной среде в диапазоне
концентраций
от 100 до
50000 клеток в
1 куб. м воздуха при доверительной
вероятности 0,95. ПДК - 2000 кл./куб.
м.
р.з.
4. Метод
измерений
Метод основан на
аспирации из воздуха клеток Lactobacillus casei-21 на
поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным
морфологическим признакам.
5. Средства
измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и
материалы
При выполнении
измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и
материалы.
5.1.
Средства измерений,
вспомогательные
устройства, материалы
Прибор
для бактериологического анализа воздуха,
ТУ 64-12791-77
модель
818 (щелевой прибор Кротова)
Термостаты
электрические суховоздушные или
водяные
Автоклав
электрический
ГОСТ 9586-75
Бокс,
оборудованный бактерицидными лампами
Холодильник
бытовой
Весы
лабораторные аналитические типа
ВЛА-200
Микроскоп
биологический с иммерсионной системой
типа
"Биолам" Л-211
Лупа
с увеличением х10
ГОСТ 25706-83
Чашки
Петри бактериологические плоскодонные
диаметром
100 мм
Пробирки
биологические вместимостью 20 и 35 мл
ГОСТ 10515-75
Пипетки
мерные на 1, 5 и 10 мл ГОСТ 10515-75
Колбы
конические вместимостью 250 и 500 мл
ГОСТ 1770-74
Секундомер ГОСТ
9586-75
Барометр ГОСТ
24696-79
Марля
медицинская ГОСТ 9412-77
Вата
медицинская гигроскопическая
ГОСТ 25556-81.
5.2.
Реактивы, растворы
Агар микробиологический ГОСТ 17206-96
Селективная
среда для молочнокислых палочек
Lactobacillus casei-21
Среда
Рогозы (состав питательной среды %):
дрожжевой
экстракт - 0,5;
триптический гидролизат казеина
- 1,0;
твин-80
- 0,1;
глюкоза
- 2,0;
натрий
уксуснокислый - 2,5;
лимоннокислый
аммоний - 0,2;
ледяная
уксусная кислота - 0,132;
соль Б - (магний сернокислый - 11,5 г; марганец
сернокислый
- 2,86 г; железо сернокислое -
0,58 г; вода 100 мл) - 0,5;
калий
фосфорнокислый однозамещенный - 0,6,
рН
среды 0,6;
вода
водопроводная - 100 мл;
агар-агар
- 1,5.
Стерилизация при
3/4 атмосферы 20 мин. После остывания раствора добавляют 9 мл этилового спирта
для подавления посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20 мл в чашки Петри.
6.
Требования безопасности
При выполнении
измерений концентрации клеток Lactobacillus casei-21
в воздушной среде соблюдают:
- правила техники
безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ
12.1.005-88;
- правила
электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ
12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;
- требования,
изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике
безопасности в микробиологической промышленности" (1980);
- положения
"Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при
работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической
промышленности" (1977).
7.
Требования к квалификации операторов
К выполнению
измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним
специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки
работы в области микробиологических исследований.
8. Условия
измерений
Процессы приготовления
растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в
соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800
мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.
9.
Проведение измерений
9.1. Условия
отбора проб воздуха
Для определения
микроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата
Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время
аспирации воздуха 20 мин. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха
тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность
подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку
крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой,
одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки
прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска
прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной
чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации
и дату отбора пробы.
9.2.
Выполнение анализа
Метод предполагает
учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 -
4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200
колоний.
Селективную среду
тщательно перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на
горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на
сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие
чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
После отбора проб
воздуха чашки Петри инкубируют в термостате при 36 °С,
через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний. При необходимости
культуру подвергают микрокопированию.
10.
Вычисление результатов измерений
Расчет концентрации
клеток в 1 куб. м воздуха производят по формуле:
N х 1000
X = --------, кл./куб. м,
V
где:
Х - концентрация
клеток в воздухе;
N - количество
колоний, выросших на чашке;
1000 - коэффициент
перерасчета на 1 куб. м воздуха;
V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).
Препарат
"Байкал ЭМ-1" представляет собой консорциум микроорганизмов, в
котором Lactobacillus casei-21 составляют 30% от
общего числа микроорганизмов, Streptococcus lactis - 30%, бактерии фотосинтеза Phodopseudomonas
palistris - 30%, сахаромицеты - Saccaromyces
cerevisial - 10%. Концентрацию препарата "Байкал
ЭМ-1" рассчитывают исходя из процентного отношения микроорганизмов,
входящих в его состав, по формуле:
А = 100 х N / d,
где:
А - концентрация
консорциума (кл./куб. м);
N - концентрация
контрольного микроорганизма (кл/куб. м);
d - содержание
контрольного микроорганизма в консорциуме (%).
Контрольным
микроорганизмом для данной методики является Lactobacillus
casei-21.
11.
Оформление результатов измерений
Результаты
измерений оформляют протоколом по форме.
Протокол N ____
количественного
микробиологического анализа препарата
ЭМ-1
"Байкал" в воздухе рабочей зоны
Дата проведения
анализа ____________________________
Место отбора пробы
_________________________________
Название
лаборатории _______________________________
Юридический адрес
организации ______________________
Результаты
микробиологического анализа
|
Шифр или N пробы
|
Определяемый
микроорганизм
|
Концентрация,
кл./куб.
м
|
|
|
|
|
Ответственный
исполнитель
Научный
руководитель