Утверждаю
Главный
государственный
санитарный врач
Российской
Федерации,
Первый заместитель
Министра
здравоохранения
Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
Дата введения -
1 января 2003 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ ТИАМЕТОКСАМА
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ И АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1143-02
1. Методические
указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены
им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина);
Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А.
Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М.
Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.);
Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и
др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П.
Веселов).
2. Методические
указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному
санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России.
3. Утверждены и
введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации,
Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком
РАМН Г.Г. Онищенко.
4. Введены впервые.
1. Вводная
часть
Фирма-производитель:
НОВАРТИС АГРО АГ (Швейцария).
Торговое название:
АКТАРА.
Действующее
вещество: тиаметоксам (ЦГА 293343).
3-(2-хлор-тиазол-5-илметил)-5-метил-[1,3,5]оксадиазинан-4-илиден-N-нитроамин
(ИЮПАК).
Структурная формула
(не приводится).
C H ClN O S М. м.
291,7
8 10 5 3
Белый
кристаллический порошок без запаха.
Температура
плавления: 139,1 °C.
-9
Давление
паров при 25 °C: 6,6 x 10 Па.
Коэффициент распределения н-октанол/вода: К log P = -0,13.
ow
Растворимость при
25 °C (г/л):
ацетонитрил - 78, ацетон -
42,5, дихлорметан - 43, метанол - 10,2, этилацетат -
5,7, толуол -
0,6, вода - 4,1.
Стабильность к гидролизу при 25
°C: DT более 1 года
(pH 5 и
50
7), 4,2 дня (pH 9).
В присутствии света
в водных фотолитических условиях тиаметоксам быстро деградирует с периодом
полураспада 2,3 дня.
Может
присутствовать в воздухе рабочей зоны в виде аэрозоля.
Краткая
токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - 1560 мг/кг;
50
острая
дермальная токсичность (LD ) для крыс - более
2000 мг/г;
50
острая
ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - 3720 мг/куб. м
50
воздуха. Тиаметоксам не оказывает раздражающего
действия на кожу и
слизистую оболочку
глаз кролика. LC для рыб - более 100
мг/л
50
(96 ч).
Гигиенические
нормативы
ОБУВ в воздухе
рабочей зоны - 0,4 мг/куб. м.
ОБУВ в атмосферном
воздухе - 0,01 мг/куб. м.
Область применения
препарата
Тиаметоксам
является системным инсектицидом. Он воздействует на никотиново-ацетилхолиновый
рецептор нервной системы насекомых, обладает быстрой желудочной и контактной
активностью. Вещество обладает широким спектром активности против сосущих,
грызущих и почвенных насекомых на овощных, зерновых и цветочных культурах,
фруктовых и цитрусовых деревьях, хлопчатнике и рисе.
2. Методика
измерения концентраций тиаметоксама
в воздухе рабочей
зоны и атмосферном воздухе методом
высокоэффективной
жидкостной хроматографии
2.1.
Основные положения
2.1.1. Принцип
метода
Метод основан на
определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
(ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.
Отбор проб воздуха
осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя
лента". Количественное определение проводится методом абсолютной
калибровки.
2.1.2.
Избирательность метода
В предлагаемых
условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы.
2.1.3.
Метрологическая характеристика метода (P = 0,95)
Число
параллельных определений 6
Предел
обнаружения в 1 нг
хроматографируемом
объеме
Предел
обнаружения в воздухе
0,005 мг/куб. м
при
отборе 20 куб. дм воздуха
Диапазон
определяемых концентраций 0,005
- 0,05 мг/куб. м
Среднее
значение определения 95,0%
Стандартное
отклонение (S) 6,85%
Относительное
стандартное отклонение (DS) 2,96%
Доверительный
интервал среднего 7,61%
Суммарная
погрешность измерения не
превышает 23%
2.2.
Реактивы и материалы
Тиаметоксам
с содержанием д.в. 99,3%
(Новартис,
Швейцария)
Ацетон,
чда
ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил
для жидкостной хроматографии ТУ
6-09-4326-76
Вода
дистиллированная, деионизованная или
перегнанная
над KMnO
4
Спирт
метиловый, хч
ГОСТ 6995-77
Бумажные
фильтры "синяя лента", обезболенные, ТУ 6-09-2678-77
предварительно
промытые ацетоном, затем
ацетонитрилом
2.3.
Приборы, аппаратура, посуда
Жидкостный
хроматограф с ультрафиолетовым
детектором
фирмы Altex (США) или аналогичный
Хроматографическая
колонка стальная
длиной
20 см, внутренним диаметром 4 мм,
заполненная Лихросорбом Р8, зернением 7 мкм
Хроматографическая
колонка стальная
длиной
15 см, внутренним диаметром 4 мм,
заполненная
Диасорбом-130-С16 Т или
Диасорбом-130-С8 Т, зернением 7 мкм
(АО БиоХимМак, РФ; 119899, Москва,
Ленинские горы)
Микрошприц
для жидкостного хроматографа
вместимостью
50 - 100 мкл
Ротационный
вакуумный испаритель ИР-1М ТУ
25-11-917-76
или
аналогичный
Весы
аналитические типа ВЛА-200
ГОСТ 34104-80Е
Насос
водоструйный
ГОСТ 10696-75
Аспирационное
устройство типа ЭА-1 ТУ 25-11-1414-78
или
аналогичное
Барометр ТУ
2504-1797-75
Термометр
лабораторный шкальный ТЛ-2,
ГОСТ 215-73Е
цена
деления 1 °C, пределы измерения 0 - 55 °C
Колбы
мерные вместимостью 100 и 1000 мл ГОСТ 1770-74
Цилиндры
мерные вместимостью 10, 25 и 500 мл
ГОСТ 1770-74Е
Колбы
грушевидные со шлифом вместимостью 100 мл
ГОСТ 10394-72
Пробирки
центрифужные
ГОСТ 25336-82Е
Стаканы
химические вместимостью 100 мл ГОСТ 25336-82Е
Пипетки
вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл
ГОСТ 20292-74
Воронки
химические конусные
ГОСТ 25336-82Е
диаметром
34 - 40 мм
Груша
резиновая
Фильтродержатели
Стеклянные
палочки
2.4. Отбор
проб
Отбор проб воздуха
рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ
12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху
рабочей зоны" или ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам
определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест".
Воздух со скоростью
4 л/мин. пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в
фильтродержатель.
Для измерения
концентрации вещества на уровне 0,005 мг/куб. м следует отобрать 20 л воздуха.
Фильтры с
отобранными пробами, помещенные в герметически закрываемые склянки, можно
хранить в морозильной камере при температуре -12 °C в течение 30 дней, в
холодильнике при 4 - 6 °C - в течение 7 дней.
2.5.
Подготовка к определению
2.5.1. Очистка
растворителей
Органические растворители перед
началом работы очищают, сушат
и
перегоняют в соответствии
с типовыми методиками. Ацетонитрил
сушат
над пентоксидом фосфора
и перегоняют; отогнанный
растворитель
повторно перегоняют над
углекислым калием. Ацетон
очищают перегонкой
над перманганатом калия
и поташом (на 1 л
ацетона 10 г KMnO
и 2 г K CO ).
4 2 3
2.5.2.
Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
Отмеряют 330 мл
метанола, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, добавляют 670 мл
бидистиллированной или деионизованной воды, перемешивают, фильтруют и
дегазируют.
2.5.3.
Кондиционирование колонки
Промыть колонку для
ВЭЖХ смесью метанол-вода (33:67 по объему) в течение 30 - 45 мин. при скорости
подачи растворителя 0,7 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации
базовой линии (5 - 15 мин.).
2.5.4.
Приготовление стандартных растворов
Основной
стандартный раствор тиаметоксама с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением
0,010 г препарата, содержащего 99,3% д.в., в метаноле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в
морозильной камере при -12 °C не более месяца.
Рабочие стандартные
растворы с концентрацией 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/мл готовят из основного
стандартного раствора тиаметоксама соответствующим последовательным разбавлением
подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2). Рабочие растворы хранят в холодильнике при
температуре не выше 4 °C не более 2 дней.
2.5.5. Построение
калибровочного графика
Для построения
калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего
стандартного тиаметоксама с концентрацией 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/мл.
Осуществляют не
менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты
хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график
зависимости высоты хроматографического пика в мм от
концентрации тиаметоксама в растворе в мкг/мл.
2.6.
Описание определения
Фильтр с отобранной
пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл
ацетонитрила, помещают на встряхиватель на 10 - 12 минут. Растворитель сливают,
отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми
порциями ацетонитрила объемом 10 мл.
Объединенный
экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при
температуре не выше 30 °C, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого
воздуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2),
фильтруют или центрифугируют для удаления взвеси и хроматографируют.
2.7.
Условия хроматографирования
2.7.2. Жидкостный
хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США)
Колонка стальная
длиной 20 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Лихросорбом RP8, зернением
7 мкм
Температура колонки комнатная
Подвижная фаза метанол-вода (33:67 по
объему)
Скорость потока элюента 0,7 мл/мин.
Рабочая длина волны 255 нм
Чувствительность 0,01 ед. абсорбции на шкалу
Объем вводимой пробы 50 мкл
Время удерживания 5,14 - 5,62 мин.
тиаметоксама
Линейный диапазон 110 нг
детектирования
Образцы, дающие
пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют
подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2).
Альтернативные
неподвижные фазы:
-
Хроматографическая колонка стальная (15 см x 4 мм), заполненная
Диасорбом-130-С8 Т (5 мкм).
Условия
хроматографирования те же.
Время удерживания
тиаметоксама: около 5 мин. 30 с.
-
Хроматографическая колонка стальная (15 см x 4 мм), заполненная
Диасорбом-130-С16 Т (7 мкм).
Условия
хроматографирования те же.
Время удерживания
тиаметоксама: около 5 мин.
2.8.
Обработка результатов анализа
Содержание тиаметоксама рассчитывают методом
абсолютной
калибровки по формуле:
W
X = C -,
V
где:
X -
содержание тиаметоксама в пробе воздуха, мг/куб. м;
C -
концентрация тиаметоксама в хроматографируемом растворе,
найденная по калибровочному
графику, мкг/мл;
W - объем экстракта, подготовленного для
хроматографирования,
мл;
V - объем
пробы воздуха, отобранного для анализа, приведенного
к
стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20
°C), куб. дм.
3.
Требования техники безопасности
Необходимо
соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими
растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
4.
Разработчики
Дубовая Л.В., Макеев А.М., к. биол. н.
ВНИИ фитопатологии,
143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел.:
592-92-20.