Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

16 марта 2003 года

 

Дата введения -

1 июля 2003 года

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ ФЕНАМИДОНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.1235-03

 

1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. А.В. Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

 

1. Вводная часть

 

Фирма производитель: Байер КропСайенс (Германия).

Торговое название: Сектин (Секур).

Действующее вещество: фенамидон.

(+)-(4S)-4-метил-2-метилтио-4-фенил-(1H)-1-фениламино-2-мидазолин-5-он(ИЮПАК).

Структурная формула (не приводится).

    Эмпирическая формула: C  H  N OS. М.м.: 311.

                           17 17 3

    Бесцветное кристаллическое вещество без запаха.

    Температура плавления: 137 °С.

                                      -7

    Давление паров при 20 °С: 3,4 х 10   Па.

    Коэффициент распределения н-октанол/вода: К   log P = -2,8.

                                               ow

    Растворимость  при  20  °С  (г/л):  вода  -  25, ацетон - 250,

дихлорметан - 330, гексан - 0,001, метанол - 12, ацетонитрил - 86.

    Стабильность  к гидролизу ДT   = 22 дня (рН 9),  более  месяца

                                50

(pH 5 - 7).

    Может присутствовать в воздухе рабочей зоны в виде аэрозоля.

    Краткая  токсикологическая  характеристика. Острая пероральная

токсичность (LD  )  для  крыс  -  5000  мг/кг;  острая  дермальная

               50

токсичность   (LD  )  для   крыс   -   более   2000 мг/г;   острая

                 50

ингаляционная   токсичность  (LC  )  для  крыс -  2,1  мг/куб.  дм

                                50

воздуха.

Гигиенические нормативы: ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/куб. м.

Область применения препарата. Фенамидон - специфический системный фунгицид широкого спектра действия. Высокоэффективен против возбудителей фитофтороза картофеля и томатов, ложной мучнистой росы огурцов и лука. Обычно применяется в смеси с препаратами контактного действия. В настоящее время проходит регистрационные испытания смесевой препарат Сектин, ВДГ (100 г фенамидона + 500 г манкоцеба в 1 кг препарата) при норме расхода фунгицида 1,25 кг/га и 3 - 4-кратной обработке за сезон.

Фенамидон весьма лабильное соединение и достаточно быстро метаболизируется в растениях и объектах окружающей среды. В воде и растениях фенамидон разрушается с образованием 5-метил-5-фенил-3-фениламиноимидазолидин-2,4-диона (RPA 405862), в почве до 5-метил-2-метилтио-5-фенил-3,5-дигидроимидазол-4-она (RPA 408056).

 

2. Методика измерения концентраций фенамидона в воздухе

рабочей зоны методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии

 

2.1. Основные положения

 

2.1.1. Принцип методики

 

Методика основана на определении вещества с помощью обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя лента". Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

 

2.1.2. Избирательность метода

 

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, в т.ч. манкоцеба.

 

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95)

 

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 2 нг.

Предел обнаружения в воздухе при отборе 20 куб. дм воздуха 0,01 мг/куб. м.

Диапазон определяемых концентраций - 0,01 - 0,1 мг/куб. м.

Среднее значение определения - 93,08%.

Стандартное отклонение (S) - 2,57%.

Относительное стандартное отклонение (DS) - 1,13%.

Доверительный интервал среднего - 2,90%.

Суммарная погрешность измерения не превышает 20%.

 

2.2. Реактивы, растворы и материалы

 

Фенамидон с содержанием д. в. 95,7%

(Авентис КропСайенс, Германия)

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии         ТУ 6-09-4326-76

Вода дистиллированная, деионизованная или

перегнанная над КМO

                   4

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные,

предварительно промытые ацетоном                 ТУ 6-09-1678-77

Калия перманганат                                ГОСТ 20490-75

Метилен хлористый                                ГОСТ 12794-80

Натрия сульфат безводный, х.ч.                   ГОСТ 4166-76

Натрия гидроксид, х.ч.                           ГОСТ 4328-77

Фосфора пентоксид, ч.                            МРТУ 6-09-5759-69

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь

ацетонитрил-вода (63:37, по объему)

 

                 2.3. Приборы, аппаратура, посуда

 

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым

детектором фирмы Altex (США) или аналогичный

Самописец регистрирующий фирмы Kipp@Zonen

BD 41 или аналогичный

Хроматографическая колонка стальная,

длиной 20 см, внутренним диаметром 4 мм,

содержащая Lichrosorb RP-18, зернением 5 мкм

Хроматографическая колонка стальная,

длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм,

содержащая Kromasil 100A-C18, зернением 7 мкм

Микрошприц для жидкостного хроматографа

вместимостью 100 мкл

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М

или аналогичный                                   ТУ 25-11-917-76

Весы аналитические типа ВЛА-200                   ГОСТ 34104-80Е

Насос водоструйный                                ГОСТ 10696-75

Аспирационное устройство типа ЭА-1

или аналогичное                                   ТУ 25-11-1414-78

Барометр                                          ТУ 2504-1797-75

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена

деления 1 °С, пределы измерения 0 - 55 °С         ГОСТ 215-73Е

Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 мл           ГОСТ 1770-74

Цилиндры мерные вместимостью 500 и 1000 мл        ГОСТ 1770-74Е

Колбы грушевидные со шлифом

вместимостью 100 мл                               ГОСТ 10394-72

Пробирки центрифужные                             ГОСТ 25336-82Е

Стаканы химические вместимостью 100 мл            ГОСТ 25336-82Е

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл              ГОСТ 20292-74

Воронки химические, конусные,

диаметром 34 - 40 мм                              ГОСТ 25336-82Е

Груша резиновая

Фильтродержатели

Стеклянные палочки

 

2.4. Отбор проб

 

Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

Воздух со скоростью 4 л/мин. пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации вещества на уровне 0,01 мг/куб. м следует отобрать 20 л воздуха.

Фильтры с отобранными пробами, помещенные в герметически закрываемые склянки, можно хранить в холодильнике при 4 - 6 °С в течение 7 дней.

 

2.5. Подготовка к определению

 

2.5.1. Очистка растворителей

 

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.

 

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

 

Отмеряют 630 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, добавляют 370 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

 

2.5.3. Кондиционирование колонки

 

Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (63:37, по объему) при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. в течение 30 - 45 мин. до получения стабильной базовой линии.

 

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

 

Основной стандартный раствор фенамидона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества, содержащего 99,5% д. в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике не более месяца.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,04; 0,08; 0,2 и 0,4 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора фенамидона соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2). Рабочие растворы хранят при температуре не выше 4 °С не более 7 дней.

 

2.5.5. Построение калибровочного графика

 

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного фенамидона с концентрацией 0,04; 0,08; 0,2 и 0,4 мкг/мл.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации фенамидона в растворе в мкг/мл.

 

2.6. Описание определения

 

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл хлористого метилена, помещают на встряхиватель на 4 - 5 мин. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями хлористого метилена объемом 7 - 8 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2), фильтруют или центрифугируют для удаления взвеси и хроматографируют.

 

2.7. Условия хроматографирования

 

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США).

Колонка стальная, длиной 20 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Lichrosorb RP-18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (63:37, по объему).

Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин.

Рабочая длина волны: 240 нм.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 50 мкл.

Время удерживания фенамидона: около 6 мин.

Линейный диапазон детектирования: 2 - 20 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,4 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2).

Альтернативная неподвижная фаза:

Хроматографическая колонка стальная (15 х 4 мм), заполненная Kromasil 100А-С18 (5 мкм).

Скорость потока элюента: 0,6 мл/мин.

Условия хроматографирования: те же.

Время удерживания фенамидона: около 6 мин.

 

2.8. Обработка результатов анализа

 

Содержание фенамидона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

 

                                C х W

                            X = -----,

                                  V

 

где:

X - содержание фенамидона в пробе воздуха, мг/куб. м;

С - концентрация фенамидона в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

V - объем пробы воздуха, отобранного для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С), куб. дм.

 

3. Требования техники безопасности

 

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

 

4. Контроль погрешности измерений

 

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

 

5. Разработчики

 

Дубовая Л.В., Макеев А.М., к. биол. н.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.