Утверждаю
Главный
государственный
санитарный врач
Российской
Федерации,
Первый заместитель
Министра
здравоохранения
Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
16 мая 2003 года
Дата введения -
с момента
утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ
3-[3-(4-БРОМ-[1,1-БИФЕНИЛ]-4ИЛ)-1,2,3,4-ТЕТРАГИДРО-
1-НАФТАЛЕНИЛ]-4-ГИДРОКСИ-2Н-1-БЕНЗОПИРАН-2-ОН
(БРОДИФАКУМА)
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1353-03
1. Методические
указания подготовлены: Научно-исследовательским институтом медицины труда РАМН,
в составе Л.Г. Макеева (руководитель), Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.Н.
Грицун, Г.Ф. Громова, при участии А.И. Кучеренко (Департамент госсанэпиднадзора
Минздрава России).
2. Рекомендованы к
утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по
государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме
"Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и
методбюро п/секции "Промышленно-санитарная
химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и
профпатологии".
3. Рекомендованы к
утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому
нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации.
4. Утверждены и
введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской
Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения РФ Г.Г. Онищенко 16 мая
2003 года.
5. Введены впервые.
1. Область
применения
Настоящие
методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны
на содержание бродифакума методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в
диапазоне концентраций 0,0005 - 0,005 мг/куб. м.
2.
Характеристика вещества
2.1. Структурная
формула (не приводится).
2.2.
Эмпирическая формула С
Н ВrO .
31 23 3
2.3. Молекулярная
масса 523,45.
2.4.
Регистрационный номер CAS 56073-10-0.
2.5.
Физико-химические свойства.
Бродифакум
- кристаллический порошок белого цвета,
Т 228 -
пл.
232 °С, не растворим в
воде, эфире, гексане, хорошо
растворим в
хлороформе, ацетоне,
этаноле.
Агрегатное
состояние в воздухе - аэрозоль.
2.6.
Токсикологическая характеристика.
Бродифакум является
антикоагулянтом (нарушает свертываемость крови, повышает проницаемость
сосудов).
Ориентировочный
безопасный уровень воздействия (ОБУВ) бродифакума в воздухе рабочей зоны 0,001
мг/куб. м.
3.
Погрешность измерений
Методика
обеспечивает выполнение измерений бродифакума с погрешностью, не превышающей
+/- 13% при доверительной вероятности 0,95.
4. Метод
измерений
Измерение массовой
концентрации бродифакума выполняют методом высокоэффективной жидкостной
хроматографии с УФ-детектированием при длине волны 280
нм.
Отбор проб проводят
с концентрированием на фильтр.
Нижний предел
измерения содержания бродифакума в анализируемом объеме пробы - 0,01 мкг.
Нижний предел
измерения концентрации бродифакума в воздухе 0,0005 мг/куб. м (при отборе 240
куб. дм воздуха).
Измерению не мешают
сопутствующие вещества: бромадиалон, дифенацин, хлорфасинон.
5. Средства
измерений, вспомогательные устройства,
материалы,
реактивы, растворы
При выполнении
измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства,
материалы, реактивы, растворы.
5.1. Средства
измерений, вспомогательные устройства, материалы
Хроматограф жидкостный фирмы
"Waters", модель М-996 с градиентной системой
элюирования, автосэмплером и УФ-детектором
типа "диодная матрица"
Колонка из нержавеющей стали
длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм,
заполненная Диасорбом-130 C10-CN
(размер частиц 7 мкм)
Аспирационное устройство модель 822 ГОСТ 2.6.01-86
Фильтродержатель ТУ 95-72-05-77
Фильтры обеззоленные "синяя лента" ТУ 6-09-1676-77
Весы аналитические ВЛР-200 ГОСТ 24104-88Е
Колбы мерные, вместимостью 25 куб. см ГОСТ 1770-74Е
Стаканы химические, вместимостью 25 куб. см ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 куб. см ГОСТ 29227-91
Пробирки колориметрические,
вместимостью 10 куб. см ГОСТ 25336-82Е
Ротационный испаритель ИР-1М с набором колб ТУ 25-11-917-76
5.2. Реактивы,
растворы
Бродифакум - продукт фирмы
"Cipa Agrochimica", Италия, с содержанием
основного вещества не менее 95%,
сертификационный N 02960909
Хлороформ, ч. ТУ
6-09-4263-76
Спирт метиловый, х.ч. ГОСТ 6995-67
Ацетонитрил, х.ч. для жидкостной
хроматографии ТУ
6-09-14-2167-84
Ортофосфорная кислота
85%-ный раствор и 0,1%-ный раствор ГОСТ 10678-76
Вода бидистиллированная ГОСТ 7602-72
Допускается
использование других средств измерения, вспомогательного оборудования,
материалов и реактивов с техническими и метрологическими характеристиками и
квалификацией не хуже утвержденных в разделе.
6.
Требования безопасности
6.1. При работе с
реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с
токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.2. При проведении
анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования
противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.
6.3. При выполнении
измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила
электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по
эксплуатации прибора.
7.
Требования к квалификации оператора
К выполнению
измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим и
среднеспециальным образованием, прошедшие обучение работе на жидкостном
хроматографе.
8. Условия
измерений
8.1. Приготовление
растворов и подготовку проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/-
5) °С, атмосферном давлении
84,0 - 106,6 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.
8.2. Выполнение
измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных
технической документацией к прибору.
9.
Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением
измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку
жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор
проб.
9.1. Приготовление
растворов
9.1.1. Основной
стандартный раствор бродифакума в хлороформе с концентрацией 1 мг/куб. см
готовят растворением 26,3 мг бродифакума (с учетом % содержания основного
вещества) в мерной колбе вместимостью 25 куб. см. Раствор устойчив в течение
недели при хранении в холодильнике.
9.1.2. Стандартный
раствор N 1 с концентрацией 40 мкг/куб. см готовят разведением 1 куб. см
основного стандартного раствора хлороформом в мерной колбе, вместимостью 25
куб. см. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.
9.1.3.
Градуировочные растворы с концентрацией бродифакума от 0,4 до 4,0 мкг/куб. см
готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 хлороформом.
Растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.
9.1.4. Состав
элюента: А-ацетонитрил:метанол = 1:1
В-ортофосфорная кислота (0,1%, по объему). Ортофосфорную кислоту 0,1%-ную (по объему)
готовят следующим образом: к 99,9 куб. см бидистиллированной воды приливают 0,1
куб. см ортофосфорной кислоты.
А:В
= 95:5 (по объему).
9.2. Подготовка
прибора
Подготовку
жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по его
эксплуатации.
9.3. Установление
градуировочной характеристики
Градуировочную
характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки. Для этого вводят в
хроматограф по 25 куб. мм каждого градуировочного раствора.
Градуировочный
график строят в координатах: количество введенного бродифакума (мкг) - площадь
пика (приборные единицы). Градуировку выполняют по 6 точкам, проводя 5
параллельных определений для каждой концентрации согласно табл. 1.
Таблица 1
РАСТВОРЫ ДЛЯ
УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ
ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ
ОПРЕДЕЛЕНИИ БРОДИФАКУМА
┌───────┬─────────────┬──────────┬──────────────┬────────────────┐
│N
стан-│ Стандартный │Хлороформ,│
Концентрация │Содержание
│
│дарта │
раствор │ куб. см │бродифакума в │бродифакума в │
│ │ бродифакума │
│градуировочном│хроматографируе-│
│ │N 1, куб. см │ │ растворе,
│мом объеме, мкг │
│ │ │ │ мкг/куб. см │ │
├───────┼─────────────┼──────────┼──────────────┼────────────────┤
│1 │0,25 │24,75 │0,4 │0,01 │
│2 │0,5 │24,5 │0,8 │0,02 │
│3 │1,0 │24,0 │1,6 │0,04 │
│4 │1,5 │23,5 │2,4 │0,06 │
│5 │2,0 │23,0 │3,2 │0,08 │
│6 │2,5 │22,5 │4,0 │0,1 │
└───────┴─────────────┴──────────┴──────────────┴────────────────┘
Условия проведения анализа:
температура термостата колонки 20
°С;
скорость подачи элюента 0,7 куб. см/мин.;
длина волны УФ-детектора 280 нм;
объем вводимой пробы 25 куб. мм;
время удерживания бродифакума 4 мин. 54 с.
Проверку
градуировочного графика проводят не реже 1 раза в 3 месяца и при изменении
условий анализа.
9.4. Отбор проб
воздуха
Воздух с объемным
расходом 20 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента",
помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ОБУВ
бродифакума следует отобрать 240 куб. дм воздуха.
Отобранные пробы
могут храниться в течение месяца в пробирках с притертыми пробками.
10.
Выполнение измерения
Фильтр с
отобранной пробой помещают в химический стакан вместимостью 25 куб. см и дважды
экстрагируют хлороформом по 5 куб. см. Экстракты объединяют и переносят в
остродонную колбу и упаривают на ротационном испарителе досуха при температуре
не выше 40 °С. Степень десорбции бродифакума с фильтра 98%. Сухой остаток
растворяют в 0,3 куб. см хлороформа.
Хроматографический анализ проб выполняют в тех же условиях, что и
хроматографирование градуировочных растворов.
Количественное
содержание бродифакума в хроматографируемом объеме (в мкг) определяют по
предварительно построенному градуировочному графику.
11.
Вычисление результатов измерения
Концентрацию
бродифакума в воздухе (С, мг/куб. м) вычисляют по формуле:
а х в
С = -----,
б х V
где:
а - содержание
бродифакума в хроматографируемом объеме, найденное по градуировочному графику,
мкг;
в - общий объем
раствора пробы, куб. мм;
б - объем раствора пробы, взятой для анализа, куб. мм;
V - объем воздуха,
отобранного для анализа (куб. дм) и приведенного к стандартным условиям
(Прилож. 1).
12.
Оформление результатов анализа
Результат
количественного анализа представляют в виде:
(С +/- ДЕЛЬТА)
мг/куб. м, Р = 0,95,
значение ДЕЛЬТА =
0,000011 + 0,13С мг/куб. м, где:
ДЕЛЬТА -
характеристика погрешности;
С - значение массовой концентрации анализируемого компонента в пробе.
13.
Контроль погрешности методики КХА
Значения
характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и
норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.
Таблица 2
|
Диапазон
определяемых
концентраций
бродифакума,
мг/куб. м
|
Наименование метрологической
характеристики
|
|
характеристика
погрешности
ДЕЛЬТА,
мг/куб. м,
р =
0,95
|
норматив
оперативного
контроля
погрешности,
К, мг/куб. м
(р =
0,90,
m = 3)
|
норматив
оперативного
контроля
воспроизводимости,
D, мг/куб. м
(р = 0,95, m
= 2)
|
|
0,0005
- 0,005
|
0,000011
+ 0,13С
|
0,000038
+
0,17С
|
0,000066
+ 0,39С
|
Метрологические
характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации
анализируемого компонента в пробе (С).
13.1. Оперативный
контроль погрешности
Оперативный
контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.
Образцами для
контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для
контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для
проведения анализа по методике.
После
отбора пробы экстракт с
фильтра делят на две равные
части, первую
из которых анализируют
в точном соответствии с
прописью методики и получают результат
анализа исходной рабочей
пробы (С ). Вторую часть
разбавляют соответствующим растворителем
1
в два раза
и снова на
две равные части,
первую из которых
анализируют в точном
соответствии с прописью методики,
получая
результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два
раза (С ). Во
2
вторую
часть делают добавку
анализируемого компонента (X)
до массовой
концентрации исходной рабочей
пробы (С )
(общая
1
концентрация
не должна выходить за
верхнюю границу диапазона
измерений)
и анализируют в
точном соответствии с
прописью
методики, получая
результат анализа рабочей пробы, разбавленной в
два раза, с
добавкой (С ). Результаты анализа
исходной
рабочей
3
пробы (С ), рабочей пробы,
разбавленной в два раза (С ) и рабочей
1 2
пробы,
разбавленной в два
раза с добавкой
(С )
получают по
3
возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает
один аналитик
с
использованием одного набора
мерной посуды, одной
партии
реактивов и т.д.
Решение об удовлетворительной погрешности
принимают при
выполнении условия:
|С - С - Х| + |2С
- С | <= К,
3 2 2
1
где:
С - результат анализа рабочей пробы;
1
С - результат анализа рабочей пробы,
разбавленной в два раза;
2
С - результат анализа рабочей пробы,
разбавленной в два раза,
3
с добавкой анализируемого компонента;
X -
величина добавки анализируемого компонента;
К - норматив оперативного контроля
погрешности.
К = 0,000038 + 0,17С мг/куб. м
13.2. Оперативный
контроль воспроизводимости
Образцами для
контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для
контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для
проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на
две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики,
максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата
анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы
мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны
отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами
анализа:
|С - С | <= D,
1 2
где:
С - результат анализа рабочей пробы;
1
С - результат
анализа этой же
пробы, полученный в другой
2
лаборатории
или в этой же, но другим
аналитиком с использованием
другого набора мерной посуды и других партий
реактивов;
D - допустимые расхождения между результатами
анализа одной и
той же пробы.
D = 0,000066 + 0,39С мг/куб. м
При превышении
норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При
повторном превышении указанного норматива D, выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам контроля и устраняют их.
14. Нормы
затрат времени на анализ
Для проведения
серии анализов из 6 проб требуется 1 ч 30 мин.
Методические
указания разработаны: НИИ медицины труда РАМН (Е.Н. Грицун, А.В. Кудряшов); НПЦ
"Родемос" (В.С. Лапко).
Приложение
1
ПРИВЕДЕНИЕ
ОБЪЕМА ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
Приведение объема
воздуха к стандартным условиям (T 20 °С и давление
101,33 кПа) проводят по формуле:
V х (273 + 20) x Р
t
V = -------------------,
20 (273 + t) х 101,33
где:
V - объем воздуха, отобранный для анализа, куб.
дм;
t
Р - барометрическое давление,
кПа (101,33 кПа = 760 мм рт.
ст.);
t -
температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
Для удобства
расчета V следует
пользоваться таблицей
20
(коэффициентов (Прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным
условиям надо умножить V на соответствующий коэффициент.
t
Приложение
2
КОЭФФИЦИЕНТЫ
ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА ВОЗДУХА
К СТАНДАРТНЫМ
УСЛОВИЯМ
|
Давление Р, кПа/мм рт. ст.
|
|
°С
|
97,33/
730
|
97,86/
734
|
98,4/
738
|
98,93/
742
|
99,46/
746
|
100/
750
|
100,53/
754
|
101,06/
758
|
101,33/
760
|
101,86/
764
|
|
-30
|
1,1582
|
1,1646
|
1,1709
|
1,1772
|
1,1836
|
1,1899
|
1,1963
|
1,2026
|
1,2058
|
1,2122
|
|
-26
|
1,1393
|
1,1456
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1644
|
1,1705
|
1,1768
|
1,1831
|
1,1862
|
1,1925
|
|
-22
|
1,1212
|
1,1274
|
1,1336
|
1,1396
|
1,1458
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1643
|
1,1673
|
1,1735
|
|
-18
|
1,1036
|
1,1097
|
1,1158
|
1,1218
|
1,1278
|
1,1338
|
1,1399
|
1,1460
|
1,1490
|
1,1551
|
|
-14
|
1,0866
|
1,0926
|
1,0986
|
1,1045
|
1,1105
|
1,1164
|
1,1224
|
1,1284
|
1,1313
|
1,1373
|
|
-10
|
1,0701
|
1,0760
|
1,0819
|
1,0877
|
1,0986
|
1,0994
|
1,1053
|
1,1112
|
1,1141
|
1,1200
|
|
-6
|
1,0540
|
1,0599
|
1,0657
|
1,0714
|
1,0772
|
1,0829
|
1,0887
|
1,0945
|
1,0974
|
1,1032
|
|
-2
|
1,0385
|
1,0442
|
1,0499
|
1,0556
|
1,0613
|
1,0669
|
1,0726
|
1,0784
|
1,0812
|
1,0869
|
|
0
|
1,0309
|
1,0366
|
1,0423
|
1,0477
|
1,0535
|
1,0591
|
1,0648
|
1,0705
|
1,0733
|
1,0789
|
|
+2
|
1,0234
|
1,0291
|
1,0347
|
1,0402
|
1,0459
|
1,0514
|
1,0571
|
1,0627
|
1,0655
|
1,0712
|
|
+6
|
1,0087
|
1,0143
|
1,0198
|
1,0253
|
1,0309
|
1,0363
|
1,0419
|
1,0475
|
1,0502
|
1,0557
|
|
+10
|
0,9944
|
0,9999
|
0,0054
|
1,0108
|
1,0162
|
1,0216
|
1,0272
|
1,0326
|
1,0353
|
1,0407
|
|
+14
|
0,9806
|
0,9860
|
0,9914
|
0,9967
|
1,0027
|
1,0074
|
1,0128
|
1,0183
|
1,0209
|
1,0263
|
|
+18
|
0,9671
|
0,9725
|
0,9778
|
0,9830
|
0,9884
|
0,9936
|
0,9989
|
1,0043
|
1,0069
|
1,0122
|
|
+20
|
0,9605
|
0,9658
|
0,9711
|
0,9783
|
0,9816
|
0,9868
|
0,9921
|
0,9974
|
1,0000
|
1,0053
|
|
+22
|
0,9539
|
0,9592
|
0,9645
|
0,9696
|
0,9749
|
0,9800
|
0,9853
|
0,9906
|
0,9932
|
0,9985
|
|
+24
|
0,9475
|
0,9527
|
0,9579
|
0,9631
|
0,9683
|
0,9735
|
0,9787
|
0,9839
|
0,9865
|
0,9917
|
|
+26
|
0,9412
|
0,9464
|
0,9516
|
0,9566
|
0,9618
|
0,9669
|
0,9721
|
0,9773
|
0,9799
|
0,9851
|
|
+28
|
0,9349
|
0,9401
|
0,9453
|
0,9503
|
0,9555
|
0,9605
|
0,9657
|
0,9708
|
0,9734
|
0,9785
|
|
+30
|
0,9288
|
0,9339
|
0,9391
|
0,9440
|
0,9432
|
0,9542
|
0,9594
|
0,9645
|
0,9670
|
0,9723
|
|
+34
|
0,9167
|
0,9218
|
0,9268
|
0,9318
|
0,9368
|
0,9418
|
0,9468
|
0,9519
|
0,9544
|
0,9595
|
|
+38
|
0,9049
|
0,9099
|
0,9149
|
0,9199
|
0,9248
|
0,9297
|
0,9347
|
0,9397
|
0,9421
|
0,9471
|
Приложение
4
ВЕЩЕСТВА,
ОПРЕДЕЛЯЕМЫЕ ПО РАНЕЕ УТВЕРЖДЕННЫМ МЕТОДИЧЕСКИМ
УКАЗАНИЯМ ПО
ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВРЕДНЫХ ВЕЩЕСТВ
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ
ЗОНЫ
|
Название вещества
|
Опубликованные методические указания
|
|
1
|
2
|
|
Желатин
|
МУ
N 1719-77 "Методические указания на
гравиметрическое определение пыли в
воздухе рабочей зоны и в системах
вентиляционных установок". - Вып. 1 -
5. - М., 1981. - 235 с.
|
|
Крахмал
|
-"-
|
|
Сахарная
пудра (сахароза)
|
-"-
|