Утверждаю
Главный
государственный
санитарный врач
Российской
Федерации,
Первый заместитель
Министра
здравоохранения
Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
24 июня 2003 года
Дата введения:
30 июня 2003 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИИ ФЕНПИРОКСИМАТА В ВОЗДУХЕ
РАБОЧЕЙ
ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.1440-03
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром
гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В.
Юдина), Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А.
Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной
службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
(А.П. Веселов).
2. Методические
указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному
санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены
Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия
человека, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.
4. Введены впервые.
1. Вводная
часть
Фирма-производитель:
Нихон Нохияку Компани, ЛТД, Япония.
Торговое название:
Ортус.
Название
действующего вещества по ИСО: Фенпироксимат.
Название
действующего вещества по ИСО: трет-бутил (Е)-альфа-(1,3-диметил-5-феноксипиразол-4-ил-метиленамино-р-толуат-окси)
метил бензоат.
Структурная формула
(не приводится).
Эмпирическая формула: C H N O .
24 27 3 4
Молекулярная масса:
421,5.
Химически чистый Фенпироксимат представляет собой белое
кристаллическое вещество без запаха.
Давление паров -
0,0075 мПа (при 25 °С).
Температура
плавления - 101,1 - 102,4 °С.
Коэффициент
распределения н-октанол - вода: Кow log Р = 5,01 (20
°С).
-2
Растворимость в воде составляет при 25 °С -
1,46 х 10 мг/л.
Растворимость в органических
растворителях (г/л при 25 °С):
дихлорметан
- 1307, хлороформ - 1197, ацетон
- 150, метанол - 15
г/л.
Краткая гигиеническая
характеристика: Фенпироксимат относится
к умеренно опасным по острой оральной (ЛД
/крысы/ 245-480 мг/кг)
50
и
дермальной (ЛД /крысы/
свыше 2000 мг/кг)
токсичности
50
веществам, но чрезвычайно
опасным по ингаляционной (ЛД
/крысы/
50
4 ч. 0,33 - 0,36
мг/л) токсичности. Вызывает
очень слабое
раздражение кожи и
среднее раздражение слизистых оболочек глаз.
При хроническом воздействии может оказывать
слабое
тератогенное
действие.
В России
установлены следующие гигиенические нормативы:
ДСД - 0,005
мг/кг/сут.;
ОБУВ в воздухе
рабочей зоны - 0,05 мг/куб. м;
ПДК в воде - 0,001
мг/л;
ОДК в почве - 0,3
мг/кг;
МДУ (мг/кг) в
яблоках, винограде - 0,2.
Область применения:
Фенпироксимат является контактным акарицидом из группы пиразолов,
предназначенным для уничтожения различных видов клещей. Зарегистрирован в
России и странах СНГ под торговой маркой Ортус, ск (50 г/л) в качестве
акарицида на яблоне с нормой расхода 0,5 - 0,9 л/га, а также на виноградниках с
нормой расхода 0,6 - 0,9 л/га при 2-кратной обработке.
При определенных
условиях может трансформироваться в растениях и объектах окружающей среды с образованием
Z-изомера и деметилфенпироксимата.
2. Методика
определения Фенпироксимата в воздухе рабочей
зоны методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1.
Основные положения
2.1.1. Принцип
метода
Методика основана
на определении Фенпироксимата методом высокоэффективной жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора.
Отбор проб воздуха
осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя
лента". Количественное определение проводится методом абсолютной
калибровки.
2.1.2.
Избирательность метода
В предлагаемых
условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при
возделывании плодовых культур и виноградников (хлор- и фосфорорганические
соединения, синтетические пиретроиды, фенилмочевины, тио-
и дитиокарбаматы и т.д.).
2.1.3.
Метрологическая характеристика метода (Р = 0,05)
Число параллельных
определений - 6.
Предел обнаружения
в хроматографируемом объеме - 1 нг (значение для "Hewlett-Packard НР 1050");
2 нг (значение для "Милихром-4").
Предел обнаружения
в пробе - 0,01 мг/куб. м (при отборе 10 л воздуха).
Диапазон
определяемых концентраций - 0,01 - 0,1 мг/куб. м.
Среднее значение
определения - 92,2%.
Стандартное
отклонение - 5,33%.
Относительное стандартное
отклонение - 2,17%.
Доверительный
интервал среднего - 5,6%.
Суммарная
погрешность измерения не превышает 25%.
2.2.
Реактивы, растворы, материалы и оборудование
2.2.1. Реактивы,
растворы и материалы
Фенпироксимат,
х.ч., аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,7%.
Ацетонитрил, ч., ТУ
6-09-3534-87.
н-Гексан, ч., ТУ
6-09-3375-78.
Хлороформ,
Фармакопея СССР.
Вода
дистиллированная, ГОСТ 6709.
Фильтры бумажные,
ТУ-6-09-1678-86.
2.2.2. Приборы,
аппаратура, посуда
Жидкостной хроматограф "Hewlett-Packard НР 1050" с ультрафиолетовым
детектором или аналогичный (например, "Beckman Gold System").
Хроматографическая
колонка обращенно-фазовая Hypersyl RP-18, размером 200 мм х 4, 6 мм или
аналогичная.
Жидкостной хроматограф "Милихром-4" (Россия) с ультрафиолетовым
детектором.
Колонка
аналитическая КАХ-4643, содержащая носитель Separon С18.
Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73.
Ротационный
вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.
Насос водоструйный,
ГОСТ 25336, или вакуумный насос масляный типа ВН-461-М или аналогичный.
Микрошприцы, ГОСТ
20292-74.
Баня водяная, ТУ
64-1-2850.
Колбы конические
плоскодонные на 100 и 250 мл с притертыми пробками (шлиф N 29), КПШ-100-29/32 и
КПШ-250-29/32, ГОСТ 10394-72.
Воронки для
фильтрования стеклянные ГОСТ 8613.
Воронки делительные
стеклянные на 100 и 500 мл, ГОСТ 8613.
Колбы круглодонные
на шлифах на 250 мл, ГОСТ 25336-83.
Концентраторы
конические НШ 19, КГУ-100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72.
Колбы грушевидные
на шлифах на 50 и 100 мл, КГУ 50-14/19 и КГУ 100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72.
Пробирки градуированные стеклянные на 10 и 25 мл, ГОСТ 1770-74 Е.
Пипетки мерные на
100 мл, ГОСТ 25336-82.
Стаканы стеклянные
на 100 мл, ГОСТ 25336-82 Е.
Колбы мерные на 50,
100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74 Е.
Фильтры бумажные
"синяя лента", ТУ 6-09-2678.
Весы аналитические
ВЛР-200 г, ГОСТ 24104-80.
Аспирационное
устройство типа ЭА-1, ТУ 25-11-1414-78, или аналогичное.
Фильтродержатели.
2.3.
Подготовка к определению
2.3.1. Подготовка
растворителей и приготовление подвижных фаз для ВЭЖХ-хроматографии
2.3.1.1. Метод
очистки ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят
с обратным холодильником над пентаоксидом фосфора несколько раз до тех пор,
пока ацетонитрил не перестанет окрашиваться. После этого ацетонитрил отгоняют и
перегоняют еще раз над карбонатом калия.
2.3.1.2. Метод
очистки гексана
Гексан (1 л)
выдерживают 15 часов с концентрированной серной кислотой (0,1 л). Гексан
аккуратно декантируют в делительную воронку и трижды промывают:
дистиллированной водой, 2%-ным водным раствором гидроксида натрия и снова
водой. Осушают гексан гидроксидом калия, после чего перегоняют.
2.3.1.3.
Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ с обращенной фазой
Бидистиллят
получают с помощью лабораторного бидистиллятора. Для
получения подвижной фазы (ВЭЖХ) 750 мл ацетонитрила смешивают с 250 мл
бидистиллята (800 мл и 200 мл для "Милихрома"). Полученную фазу
тщательно дегазируют путем продувки гелием или вакуумированием в течение 10
мин. (до окончания вскипания при встряхивании).
2.3.2. Подготовка
хроматографической системы к проведению анализа
Подготовку
хроматографической системы проводят согласно заводской инструкции по
эксплуатации хроматографа.
2.3.3.
Приготовление стандартных растворов
На аналитических весах
взвешивают 10 мг Фенпироксимата в колбе на 100 мл. Навеску растворяют в очищенном ацетонитриле и доводят объем до метки.
Полученный раствор
с концентрацией 0,1 мг/мл (стандартный раствор N 1) хранят в холодильнике в
течение 1 месяца.
Непосредственно перед
анализом готовят серийные разведения стандартных растворов с концентрацией 2,
1, 0,5 и 0,1 мкг/мл. Для этого из стандартного раствора с концентрацией 100
мкг/мл (стандартные растворы N 1 и N 2) отбирают 2 мл, переносят в мерную колбу
на 100 мл, доводят до метки ацетонитрилом и тщательно перемешивают. Затем
бинарными разведениями получают стандартные растворы с требуемой концентрацией.
Вводят в
хроматограф по 10 мкл каждого раствора, измеряют высоты пиков и строят график
зависимости высоты пика от концентрации анализируемого вещества.
2.4. Отбор
проб
Отбор проб воздуха
рабочей зоны проводится в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88
"ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей
зоны".
Воздух со скоростью
5 л/мин. пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в
фильтродержатель.
2.5.
Описание определения
Фильтр с отобранной
пробой измельчают ножницами, помещают в колбу емкостью 100 мл и экстрагируют 50
мл гексана в течение 1 часа. Экстракт отфильтровывают, навеску фильтра вновь
экстрагируют 50 мл гексана.
Объединенный
экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе
досуха, при температуре водяной бани 40 °С. Остаток растворяют в 1 мл
перегнанного ацетонитрила и хроматографируют.
2.6.
Условия хроматографирования и обработка результатов
2.6.1. Жидкостной хроматограф "Hewlett-Packard НР 1050"
или аналогичный.
Детектор
ультрафиолетовый, длина волны 258 нм.
Подвижная фаза:
ацетонитрил/вода (75:25).
Скорость потока -
1,5 мкл/мин.
Объем дозирования -
10 мкл.
Чувствительность
детектора - 2,000 aufs.
2
Показания
атенюатора - 2 .
Скорость протяжки
ленты - 0,2 мм/мин.
Линейный диапазон -
1 - 60 нг/колонку.
Время удерживания
Фенпироксимата - 9,8 - 10,0 мин.
Хроматограф
"Милихром-4".
Колонка
обращенно-фазовая КАХ-4643.
Детектор
ультрафиолетовый, длина волны 258 нм.
Подвижная фаза:
ацетонитрил/вода (80:20).
Скорость потока -
50 мкл/мин.
Объем дозирования -
10 мкл.
Чувствительность
детектора - 0,002 ед.оп.
Масштаб регистрации
- 0,08
Чувствительность
самописца - 0,1 V.
Скорость протяжки
ленты - 0,2 мм/мин.
Линейный диапазон -
2 - 60 нг/колонку.
Объем удерживания
Фенпироксимата - 590 мкл (11,8 мин.).
Каждую
анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы с
концентрацией больше чем 5 мкг/мл (по стандартному раствору) разбавляют
ацетонитрилом.
2.6.2. Обработка
результатов анализа
Содержание
Фенпироксимата рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
М х Н
х V
st ob
ob
Х = ---------------,
Н х V
х М
st ин
н
где:
Х - содержание
Фенпироксимата в пробе воздуха, мг/куб. м;
М - количество стандарта, введенного в
хроматограф, нг;
st
Н - высота пика вещества в образце, мм;
ob
Н - высота пика вещества в стандарте, мм;
st
V - объем образца, подготовленного для хроматографирования,
ob
мл;
V - объем образца, введенного в хроматограф,
мкл;
ин
М - масса навески, взятой для анализа (100 л
для воздуха).
н
3.
Требования техники безопасности
Необходимо
соблюдать общепринятые правила безопасности в лаборатории при работе с
органическими растворителями, ЛВЖ, токсичными веществами и
электронагревательными приборами.
4.
Разработчики
А.В. Чигрин,
главный специалист контрольно-токсикологической лаборатории
"Краснодарская", кандидат биологических наук; Т.Ю. Тимофеева,
химик-аналитик контрольно-токсикологической лаборатории
"Краснодарская".
Телефон:
8-61-224-48-67.
В.А. Калинин,
профессор, канд. с.-х.. наук.
Московская
сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева, Испытательная лаборатория
пищевой и сельскохозяйственной продукции, кафедра химических средств защиты
растений.
127550, Москва,
Тимирязевский пр., 2.
Телефон: (095)
976-02-20.