Утверждаю
Главный
государственный
санитарный врач
Российской
Федерации,
Первый заместитель
Министра
здравоохранения
Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
29 июня 2003 года
Дата введения -
с момента
утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ
АЛЛОХОЛА (ПО СУММЕ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ
ЗОНЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1615-03
1. Методические
указания подготовлены творческим коллективом специалистов
Научно-исследовательского института медицины труда РАМН (Л.Г. Макеева -
руководитель, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.Н. Грицун, Г.Ф. Громова) при
участии А.И. Кучеренко (Департамент Госсанэпиднадзора Минздрава России).
2. Рекомендованы к
утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по
государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме
"Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и
методбюро п/секции "Промышленно-санитарная
химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и
профпатологии".
3. Рекомендованы к
утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому
нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации.
4. Утверждены и
введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской
Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации
29.06.03.
5. Введены впервые.
1. Область
применения
Настоящие
Методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический
анализ воздуха рабочей зоны на содержание суммы желчных кислот в диапазоне
концентраций 0,05 - 0,50 мг/куб. м.
2.
Характеристика вещества
2.1.
Физико-химические свойства.
В
состав лекарственного препарата аллохол входят желчь сухая
бычья (38%), чеснок сушеный (19%), листья крапивы (2,4%), уголь
активированный (11,9%) и
вспомогательные вещества (28,7%). В желчи
содержатся
различные желчные кислоты
- монокарбоновые
гидроксикислоты,
относящиеся к классу
стероидов, кристаллы с
температурами
плавления от 140
до 250 °С. В
желчи быка
присутствуют
в основном холевая
(Т 199 °С) и дезоксихолевая
пл.
(Т 177
°С) кислоты в виде щелочных солей конъюгатов указанных
пл.
кислот с
таурином или глицином, при этом
массовая доля холевых
кислот составляет не менее 30%.
Желчные кислоты
плохо растворимы в воде, растворимы в этиловом спирте.
Агрегатное
состояние в воздухе - аэрозоль.
2.2.
Токсикологическая характеристика.
Препарат аллохол
обладает общетоксическим и гепатотропным действием.
Предельно
допустимая концентрация препарата аллохола в воздухе рабочей зоны (по сумме
массовых концентраций желчных кислот) - 0,1 мг/куб. м.
3.
Погрешность измерений
Методика
обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций суммы желчных кислот в
воздухе с погрешностью, не превышающей +/- 15% при доверительной вероятности
0,95.
4. Метод
измерений
Измерение массовых
концентраций желчных кислот (по холевой кислоте) выполняется методом
спектрофотометрии. Метод основан на взаимодействии кислот с сахарозой с
образованием окрашенного в желтый цвет продукта реакции. Измерение проводят при
длине волны 575 нм.
Отбор проб проводят
с концентрированием на фильтр.
Нижний предел
измерения содержания желчных кислот в анализируемой пробе 20 мкг.
Нижний предел
измерения концентрации желчных кислот в воздухе (при отборе 1000 куб. дм
воздуха) 0,05 мг/куб. м.
Определению не
мешают крахмал, тальк, магния карбонат, титана диоксид, тропеолин.
5. Средства
измерений, вспомогательные устройства,
материалы, реактивы
5.1. Средства
измерений, вспомогательные устройства,
материалы
Спектрофотометр
СФ-46
Пробоотборное
устройство ПУ-3Э ТУ
4215-11696625-95
Весы
аналитические ВЛА-200
ГОСТ 24104-88Е
Меры
массы Г-2-2106 2 кл.
ГОСТ 7328-82Е
Фильтр
АФА-ВП-10
ТУ 95-743-80
Колбы
мерные вместимостью
50,
100 и 500 куб. см
ГОСТ 1770-74Е
Цилиндр
мерный вместимостью 500 куб. см
ГОСТ 1770-74Е
Пипетки
вместимостью 1, 2, 5 и 10 куб. см
ГОСТ 29227-91
Бюксы
50/30
ГОСТ 25336-82Е
Пробирки
с пришлифованными пробками
вместимостью
10 куб. см ГОСТ
25336-82Е
Кюветы
с толщиной оптического слоя 50 мм
Стаканчики
для взвешивания ГОСТ
25336-82Е
Баня
водяная ТУ 64-1-2850-76
Термометр ГОСТ
215-73
Холодильник
бытовой ГОСТ
16317-87
5.2. Реактивы
Холевая
кислота, содержание основного
вещества
98% ТУ
6-09-10-1585-83
Серная
кислота концентрированная,
плотность
1,84 г/куб. см ГОСТ
4204-77
Спирт
этиловый, х.ч.
ГОСТ 5963-67
Сахароза ГОСТ
5833-75
Кислота
уксусная ледяная ГОСТ 61-75
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
Допускается
применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и
материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных
Методических указаний.
6.
Требования безопасности
6.1. При работе с
реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с
токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.2. При проведении
анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной
безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.
6.3. При выполнении
измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила
электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по
эксплуатации прибора.
6.4. Работа на
спектрофотометре должна проводиться в чистом помещении, свободном от пыли,
паров кислот и щелочей. Вблизи спектрофотометра не должны располагаться
громоздкие изделия, создающие неудобства в работе оператора.
6.5. В процессе
работы необходимо соблюдать правила техники безопасности при работе с
химической посудой.
7.
Требования к квалификации операторов
К выполнению
измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим и средним
специальным образованием, имеющие навыки работы на спектрофотометре.
8. Условия
измерений
8.1. Процессы
приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных
условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и влажности воздуха не
более 80%.
8.2. Выполнение
измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической
документацией к прибору.
9.
Подготовка к выполнению измерений
9.1.
Приготовление растворов
9.1.1.
Приготовление стандартного раствора кислоты холевой концентрацией 100 мкг/куб.
см. Навеску 10 мг кислоты холевой растворяют в нескольких куб. см спирта
этилового в мерной колбе вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора
спиртом до метки. Срок годности раствора - 10 суток при хранении в
холодильнике.
9.1.2. Приготовление
раствора сахарозы концентрацией 10 мг/куб. см. Растворяют в воде в мерной колбе
вместимостью 100 куб. см 1 г сахарозы и доводят объем раствора водой до метки.
Раствор используют свежеприготовленным.
9.1.3.
Приготовление 8 М раствора кислоты серной. В колбе вместимостью 500 куб. см к
200 куб. см дистиллированной воды осторожно, при постоянном перемешивании,
прибавляют 213 куб. см кислоты серной концентрированной и доводят водой до
метки. Срок годности раствора - 1 месяц при хранении в комнатных условиях.
9.2.
Подготовка прибора
Подготовку
спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.
9.3.
Установление градуировочной характеристики
Градуировочную
характеристику, выражающую зависимость величины оптической плотности раствора
от массы вещества в анализируемой пробе, устанавливают по методу абсолютной
градуировки с использованием серии градуировочных растворов согласно табл. 1,
которые готовят путем соответствующего разбавления стандартного раствора
кислоты холевой этиловым спиртом с помощью пипеток в пробирках с притертыми
пробками. Растворы можно хранить при комнатной температуре в течение 7 ч, в
холодильнике - в течение недели.
Таблица 1
РАСТВОРЫ ДЛЯ
УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ПРИ ИЗМЕРЕНИИ
МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ
|
N
стан-
дарта
|
Стандартный
раствор холе-
вой кислоты,
куб. см
|
Спирт
этиловый,
куб. см
|
Концентрация
вещества,
мкг/куб. см
|
Содержание
вещества
в анализируемом
объеме раствора,
мкг
|
|
1
|
0
|
10
|
0
|
0
|
|
2
|
1,0
|
9,0
|
10
|
20
|
|
3
|
2,0
|
8,0
|
20
|
40
|
|
4
|
3,0
|
7,0
|
30
|
60
|
|
5
|
5,0
|
5,0
|
50
|
100
|
|
6
|
7,5
|
2,5
|
75
|
150
|
|
7
|
10
|
0
|
100
|
200
|
Для получения
градуировочной зависимости по 2 куб. см каждого градуировочного раствора
переносят в колбу на 50 куб. см с притертой пробкой, прибавляют 0,8 куб. см
раствора сахарозы, пробирку с раствором ставят в стакан со смесью воды со
льдом, прибавляют 10 куб. см 8 М раствора кислоты серной и тщательно
перемешивают. Пробирку с раствором помещают в водяную баню при 60 °С на 20 мин., после чего сразу же охлаждают в стакане со
смесью воды со льдом, прибавляют 10 куб. см кислоты уксусной ледяной и измеряют
оптическую плотность на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны
575 нм в кювете с толщиной слоя 50 мм. В качестве раствора сравнения используют
градуировочный раствор N 1.
Проводят по 5
параллельных определений для каждого из 6 растворов и строят градуировочную
зависимость величины оптической плотности от количества вещества в
анализируемой пробе.
Проверку
градуировочного графика проводят 1 раз в 3 месяца или в случае смены партии
реактивов, оборудования или приборов.
9.4. Отбор
проб воздуха
Воздух с объемным
расходом 40 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в
фильтродержатель. Для определения 1/2 ПДК аллохола следует отобрать 1000 куб.
дм воздуха. Пробы можно хранить в течение недели.
10.
Выполнение измерения
Фильтр с отобранной
пробой помещают в бюкс с
пришлифованной крышкой и приливают пипеткой 5 куб. см этилового спирта.
Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин. и сливают в
пробирку. Степень экстракции с фильтра - 95%. Отбирают пипеткой 2 куб. см экстракта
и проводят фотометрические реакции аналогично тому, как и при построении
градуировочного графика. Количественное определение содержания суммы свободных
желчных кислот в растворе проводят по предварительно построенному
градуировочному графику, полученному с помощью растворов холевой кислоты по
отношению к раствору сравнения, используя чистый фильтр.
11. Расчет
концентрации вещества
Концентрацию суммы
желчных кислот в воздухе (С, мг/куб. м) вычисляют по формуле:
а х в
С = -----,
б х V
где:
а - содержание
желчных кислот в объеме пробы, взятой для анализа, мкг;
в - общий объем
экстракта с фильтра, куб. см;
б - объем пробы, взятой для анализа, куб. см;
V - объем воздуха,
отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, куб. дм (см.
Прилож. 1).
12.
Оформление результатов анализа
Результат
количественного анализа представляют в виде (С +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. м, Р = 0,95, где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, ДЕЛЬТА =
0,005 + 0,15С.
13.
Контроль погрешности методики
Значения
характеристики погрешности, норматива оперативного контроля точности и
норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде
зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе
С.
Таблица 2
РЕЗУЛЬТАТЫ
МЕТРОЛОГИЧЕСКОЙ АТТЕСТАЦИИ МЕТОДИКИ
КОЛИЧЕСТВЕННОГО
ХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
|
Диапазон
определяемых
концентраций
желчных
кислот,
мг/куб. м
|
Наименование метрологической
характеристики
|
|
характеристика
погрешности
ДЕЛЬТА,
мг/куб. м
(Р =
0,95)
|
норматив
опера-
тивного контроля
точности К,
мг/куб. м
(Р = 0,90, m = 2)
|
норматив
опера-
тивного контроля
воспроизводимости
D, мг/куб. м
(Р = 0,95, m = 2)
|
|
От
0,05
до 0,5
|
0,005
+ 0,15С
|
0,007
+ 0,16С
|
0,015
+ 0,02С
|
13.1. Оперативный
контроль воспроизводимости
Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии
с анализом
рабочих проб. Проводят
отбор двух воздушных проб с
использованием
двух пробоотборников одновременно. Анализируют в
соответствии с прописью
методики, привлекая различных исполнителей
и
максимально варьируя условия
проведения анализа: партии
реактивов, наборы мерной посуды и т.д., и получают два результата
С и С анализов. Решение об удовлетворительной
воспроизводимости
1 2
принимают при выполнении условия:
|С - С | <= D,
1 2
где D - норматив
оперативного контроля воспроизводимости. При превышении расхождения между двумя
результатами анализа норматива оперативного контроля воспроизводимости
эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют
причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
Внутренний
оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в месяц.
13.2. Оперативный
контроль точности
Оперативный контроль точности
выполняют в одной
серии с
анализом
рабочих проб. Проводят
отбор двух воздушных
проб с
использованием
двух пробоотборников
одновременно, затем к одной
пробе делают добавку анализируемого компонента
дельта С,
нанося
на фильтр
дозу раствора, содержащего
анализируемый компонент.
Величина
добавки должна соответствовать 50 - 150% от содержания
компонента
в пробе. Результаты
анализа С без
добавки и С с
1 2
добавкой
получают по возможности
в одинаковых условиях: одним
аналитиком, с
одной партией реактивов, с одним
набором посуды и
т.д.
Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки
используемых
пробоотборников. Решение об удовлетворительной
погрешности принимают при выполнении условия:
|С - С - дельта С| <= К,
2 1
где К - норматив оперативного контроля точности.
14. Нормы
затрат времени на анализ
Для проведения
серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 6
ч.
Методические
указания разработаны Российским государственным медицинским университетом
(лаборатория токсикологии и экологии, Е.Б. Гугля).
Приложение
1
ПРИВЕДЕНИЕ
ОБЪЕМА ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
Приведение объема
воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и
давление 101,33 кПа) проводят по формуле:
V х (273 + 20) х Р
t
V = -------------------,
20 (273 + t) х 101,33
где:
V - объем воздуха, отобранного для анализа,
куб. дм;
t
Р - барометрическое давление,
кПа (101,33 кПа = 760 мм рт.
ст.);
t -
температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
Для удобства
расчета V следует пользоваться таблицей
20
коэффициентов
(Прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным
условиям надо умножить V на соответствующий коэффициент.
t
Приложение
2
КОЭФФИЦИЕНТЫ
ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА ВОЗДУХА
К СТАНДАРТНЫМ
УСЛОВИЯМ
|
Давление Р, кПа/мм рт. ст.
|
|
t
°C
|
97,33/
730
|
97,86/
734
|
98,4/
738
|
98,93/
742
|
99,46/
746
|
100/
750
|
100,53/
754
|
101,06/
758
|
101,33/
760
|
101,86/
764
|
|
-30
|
1,1582
|
1,1646
|
1,1709
|
1,1772
|
1,1836
|
1,1899
|
1,1963
|
1,2026
|
1,2058
|
1,2122
|
|
-26
|
1,1393
|
1,1456
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1644
|
1,1705
|
1,1768
|
1,1831
|
1,1862
|
1,1925
|
|
-22
|
1,1212
|
1,1274
|
1,1336
|
1,1396
|
1,1458
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1643
|
1,1673
|
1,1735
|
|
-18
|
1,1036
|
1,1097
|
1,1158
|
1,1218
|
1,1278
|
1,1338
|
1,1399
|
1,1460
|
1,1490
|
1,1551
|
|
-14
|
1,0866
|
1,0926
|
1,0986
|
1,1045
|
1,1105
|
1,1164
|
1,1224
|
1,1284
|
1,1313
|
1,1373
|
|
-10
|
1,0701
|
1,0760
|
1,0819
|
1,0877
|
1,0986
|
1,0994
|
1,1053
|
1,1112
|
1,1141
|
1,1200
|
|
-6
|
1,0540
|
1,0599
|
1,0657
|
1,0714
|
1,0772
|
1,0829
|
1,0887
|
1,0945
|
1,0974
|
1,1032
|
|
-2
|
1,0385
|
1,0442
|
1,0499
|
1,0556
|
1,0613
|
1,0669
|
1,0726
|
1,0784
|
1,0812
|
1,0869
|
|
0
|
1,0309
|
1,0366
|
1,0423
|
1,0477
|
1,0535
|
1,0591
|
1,0648
|
1,0705
|
1,0733
|
1,0789
|
|
+2
|
1,0234
|
1,0291
|
1,0347
|
1,0402
|
1,0459
|
1,0514
|
1,0571
|
1,0627
|
1,0655
|
1,0712
|
|
+6
|
1,0087
|
1,0143
|
1,0198
|
1,0253
|
1,0309
|
1,0363
|
1,0419
|
1,0475
|
1,0502
|
1,0557
|
|
+10
|
0,9944
|
0,9999
|
0,0054
|
1,0108
|
1,0162
|
1,0216
|
1,0272
|
1,0326
|
1,0353
|
1,0407
|
|
+14
|
0,9806
|
0,9860
|
0,9914
|
0,9967
|
1,0027
|
1,0074
|
1,0128
|
1,0183
|
1,0209
|
1,0263
|
|
+18
|
0,9671
|
0,9725
|
0,9778
|
0,9830
|
0,9884
|
0,9936
|
0,9989
|
1,0043
|
1,0069
|
1,0122
|
|
+20
|
0,9605
|
0,9658
|
0,9711
|
0,9783
|
0,9816
|
0,9868
|
0,9921
|
0,9974
|
1,0000
|
1,0053
|
|
+22
|
0,9539
|
0,9592
|
0,9645
|
0,9696
|
0,9749
|
0,9800
|
0,9853
|
0,9906
|
0,9932
|
0,9985
|
|
+24
|
0,9475
|
0,9527
|
0,9579
|
0,9631
|
0,9683
|
0,9735
|
0,9787
|
0,9839
|
0,9865
|
0,9917
|
|
+26
|
0,9412
|
0,9464
|
0,9516
|
0,9566
|
0,9618
|
0,9669
|
0,9721
|
0,9773
|
0,9799
|
0,9851
|
|
+28
|
0,9349
|
0,9401
|
0,9453
|
0,9503
|
0,9555
|
0,9605
|
0,9657
|
0,9708
|
0,9734
|
0,9785
|
|
+30
|
0,9288
|
0,9339
|
0,9391
|
0,9440
|
0,9432
|
0,9542
|
0,9594
|
0,9645
|
0,9670
|
0,9723
|
|
+34
|
0,9167
|
0,9218
|
0,9268
|
0,9318
|
0,9368
|
0,9418
|
0,9468
|
0,9519
|
0,9544
|
0,9595
|
|
+38
|
0,9049
|
0,9099
|
0,9149
|
0,9199
|
0,9248
|
0,9297
|
0,9347
|
0,9397
|
0,9421
|
0,9471
|
Приложение
4
ВЕЩЕСТВА,
ОПРЕДЕЛЯЕМЫЕ ПО РАНЕЕ УТВЕРЖДЕННЫМ
МЕТОДИЧЕСКИМ
УКАЗАНИЯМ
┌───────────────────────┬────────────────────────────────────────┐
│ Название вещества │ Ссылка на
опубликованные методические │
│ │ указания │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│ 1 │ 2 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│1.
N-децил-N,N-диметил-│МУ по фотометрическому
измерению кон- │
│1-деканаминий
хлорид │центраций
диалкилдиметиламмоний хлорида │
│(дидецилдиметиламмоний
│(С - С ) и алкилбензилдиметиламмоний │
│хлорид;
"Арквад │ 17
20
│
│2.10.50") │хлорида (С - С )-ДОН-2, диалкиламино-│
│ │ 10
16 │
│ │пропионитрила
(С - С )-ИФХАН-ГАЗ,
ал- │
│ │ 7 9 │
│ │килтриметиламмоний
хлорида (С - С ), │
│ │ 10 16
│
│ │ДОН-52 в воздухе
рабочей зоны. N утв. │
│ │4905-88, дата
утв. 12.12.88, вып. 25, │
│ │М., 1989, с.
49 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│2.
Поликарбонофторид │МУ на
гравиметрическое определение пыли │
│ │в воздухе рабочей
зоны и в системах │
│ │вентиляционных
установок. МУ N 1719-77, │
│ │дата утв.
18.04.77, вып. 1 - 5, М., │
│ │1981, с. 235 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│3.
Препарат МЭК-Сх-3 │МУ по
фотометрическому измерению массо- │
│ │вых концентраций
эндо-1,3в-ксиланазы │
│ │(ксиланаза) в
воздухе рабочей зоны. │
│ │МУК 4.1.1642-03, дата утв.
29.06.03, │
│ │вып. 42 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│4.
Препарат ПФП-1 │МУ по
спектрофотометрическому измерению │
│ │концентрации амилазы в
воздухе рабочей │
│ │зоны. МУК
4.1.1575-03, дата утв. │
│ │29.06.03, вып.
38 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│5.
Препарат Феркон │МУ по
фотометрическому измерению массо- │
│ │вых концентраций
целловиридина в воздухе│
│ │рабочей зоны. МУК
4.1.1753-03, дата утв.│
│ │29.06.03, вып.
46 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│6.
Селенит натрия │МУ по
атомно-абсорбционному измерению │
│ │массовых
концентраций селена и диоксида │
│ │селена в воздухе
рабочей зоны. │
│ │МУК 4.1.1368-03,
дата утв. 16.05.03, │
│ │вып. 41 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│7.
Триамин G-12Д │МУ по
спектрофотометрическому измерению │
│ │концентраций
N',N'-бис-(3-аминопропил)- │
│ │додециламина(лонзабака) в воздухе рабо- │
│ │чей зоны. МУК 4.1.1522-03, дата утв. │
│ │29.06.03, вып. 37 │
└───────────────────────┴────────────────────────────────────────┘