Утверждаю
Главный
государственный
санитарный врач
Российской
Федерации,
Первый заместитель
Министра
здравоохранения
Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
29 июня 2003 года
Дата введения -
с момента
утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ПИРАЗИН-3-
КАРБОКСАМИДА (ПИРАЗИНАМИДА) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДОМ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1635-03
1. Методические
указания подготовлены творческим коллективом специалистов
Научно-исследовательского института медицины труда РАМН (Л.Г. Макеева -
руководитель, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.Н. Грицун, Г.Ф. Громова) при
участии А. И. Кучеренко (Департамент Госсанэпиднадзора Минздрава России).
2. Рекомендованы к
утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по
государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме
"Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и
методбюро п/секции "Промышленно-санитарная
химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и
профпатологии".
3. Рекомендованы к
утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому
нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации.
4. Утверждены и
введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской
Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации
29.06.03.
5. Введены впервые.
1. Область
применения
Настоящие
Методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ
воздуха рабочей зоны на содержание пиразинамида в диапазоне концентраций от 1,5
до 30,0 мг/куб. м.
2.
Характеристика вещества
2.1. Структурная
формула (не приводится).
2.2.
Эмпирическая формула: С Н N О.
5 6 3
2.3. Молекулярная
масса: 123,1.
2.4.
Регистрационный номер CAS 98-96-4.
2.5.
Физико-химические свойства.
Пиразинамид -
кристаллический порошок белого или со слегка желтоватым оттенком цвета,
температура плавления 188 - 191 °С. Растворим в воде, в смеси ацетонитрила и
воды (элюенте), малорастворим в этиловом спирте и хлороформе. Водный раствор
имеет слабокислую реакцию.
Агрегатное
состояние в воздухе - аэрозоль.
2.6. Токсикологическая
характеристика.
Пиразинамид
обладает общетоксическим действием.
Ориентировочный
безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в воздухе рабочей зоны - 3 мг/куб. м.
3.
Погрешность измерений
Методика
обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций пиразинамида с
погрешностью не более +/- 14% при доверительной вероятности 0,95.
4. Метод
измерений
Измерения массовых
концентраций пиразинамида основаны на использовании высокоэффективной жидкостной
хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны
268 нм.
Отбор проб
проводится с концентрированием на фильтр.
Нижний предел
измерения содержания пиразинамида в хроматографируемом объеме раствора - 0,020
мкг.
Нижний предел
измерения концентрации пиразинамида в воздухе - 1,5 мг/куб. м (при отборе 100
куб. дм воздуха).
Определению не
мешают крахмал, тальк, целлюлоза микрокристаллическая, титана оксид,
поливинилпирролидон низкомолекулярный.
5. Средства
измерений, вспомогательные устройства,
материалы, реактивы
5.1. Средства
измерений, вспомогательные
устройства,
материалы
Хроматограф
жидкостный микроколоночный
"Милихром"
со спектрофотометрическим
детектором
при длине волны 268 нм
Хроматографическая
колонка стальная
КАХ-44-3,
50 х 2 мм, заполненная сорбентом
Сепарон
С18, фракция 5 мкм
Аспирационное
устройство, модель 822 ГОСТ
17.26.01-86
Весы
аналитические ВЛА-200
ГОСТ 24104-88Е
Фильтродержатель ТУ 95.72.05-77
Устройство
для фильтрации жидкостей
НПФ
"Биохром"
Колбы
мерные вместимостью 50 и 500 куб. см
ГОСТ 1770-74Е
Пипетки
вместимостью от 1 до 10 куб. см
ГОСТ 29227-91
Цилиндр
мерный со шлифом вместимостью
100
куб. см ТУ 25.11.900-73
Пробирки
с пришлифованными пробками
вместимостью
10 куб. см ГОСТ
25336-82Е
Бюксы
50/30
ГОСТ 25336-82Е
Фильтры
АФА-ВП-10
ТУ 95-743-80
Фильтры
"Владипор" типа ММФК-1Г
5.2. Реактивы
Пиразинамид,
содержание основного вещества
не
менее 99,0%
ФС 42-3177-98
Ацетонитрил
"для жидкостной хроматографии"
ТУ-6-09-14-2167-84
Калий
дигидрофосфат, х.ч. ГОСТ 4198-75
Ортофосфорная
кислота, х.ч. ГОСТ
6552-58
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
Допускается
применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и
материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных
Методических указаний.
6.
Требования безопасности
6.1. При работе с
реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с
токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.2. При проведении
анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности
по ГОСТ 12.1.004-76.
6.3. При выполнении
измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в
соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
7.
Требования к квалификации оператора
К выполнению
измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим и средним
специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.
8. Условия
измерений
8.1. Приготовление
растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при
температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном
давлении 84 - 106 кПа и влажности воздуха не более 80%.
8.2. Измерения на
жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической
документацией к прибору.
9.
Подготовка к выполнению измерения
9.1. Приготовление
растворов
9.1.1. Стандартный
раствор пиразинамида в растворе элюента концентрацией 200 мкг/куб. см готовится
растворением 10 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 куб. см. Раствор
устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.
9.1.2. Раствор
дигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной
соли в 500 куб. см дистиллированной воды в колбе данного объема.
9.1.3. Раствор
элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 80 куб. см 0,02 М раствора
дигидрофосфата калия и 20 куб. см ацетонитрила. Раствор доводят до рН 4
ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с
помощью устройства для фильтрации и фильтров "Владипор" и дегазируют
под вакуумом.
9.2. Подготовка
прибора
Общую подготовку
прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.
9.3. Установление
градуировочной характеристики
Градуировочную
характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от
массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме раствора, устанавливают
по методу абсолютной калибровки с использованием серии градуировочных
растворов, которые готовят разбавлением стандартного раствора согласно табл. 1.
Растворы устойчивы в течение двух недель при хранении в холодильнике.
Таблица 1
РАСТВОРЫ ДЛЯ
УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ
ПИРАЗИНАМИДА
|
N
стан-
дарта
|
Стандартный
раствор
пиразинамида,
куб. см
|
Раствор
элюента,
куб. см
|
Концентрация
вещества,
мкг/куб. см
|
Содержание
вещества в
хроматографируемом
объеме пробы, мкг
|
|
1
|
0
|
20
|
0
|
0,0
|
|
2
|
1
|
19
|
10
|
0,02
|
|
3
|
2
|
18
|
20
|
0,04
|
|
4
|
3,5
|
16,5
|
35
|
0,07
|
|
5
|
5
|
15
|
50
|
0,1
|
|
6
|
10
|
10
|
100
|
0,2
|
|
7
|
20
|
0
|
200
|
0,4
|
Растворы помещают в
пробоотборное устройство хроматографа.
Условия
хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:
состав элюента:
ацетонитрил - 0,02 М дигидрофосфата калия, 2:8, рН 4;
скорость потока
элюента - 100 куб. мм /мин.;
объем вводимой
пробы - 2 куб. мм;
длина волны
спектрофотометрического детектора - 268 нм;
время удерживания
пиразинамида - 2 мин. 20 с.
На полученной
хроматограмме измеряют высоты пиков с помощью интегратора хроматографа (в
условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и растворителя,
проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят
градуировочную кривую зависимости площади пика от количества компонента в
хроматографируемом объеме пробы (мкг).
Проверку
градуировочного графика проводят при изменении условий анализа, но не реже 1
раза в месяц.
9.4. Отбор пробы
воздуха
Воздух с объемным
расходом 20 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА ВП-10. Для измерения
концентрации пиразинамида на уровне 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 100 куб. дм.
Пробы можно хранить в течение трех суток.
10.
Выполнение измерения
Фильтр с отобранной
пробой помещают в бюкс и
приливают пипеткой 7,5 куб. см раствора элюента. Периодически встряхивая,
выдерживают раствор в течение 5 мин. и сливают его в пробирку. Аналогичным
образом проводят повторную экстракцию с фильтра и объединяют растворы. Степень десорбции
пиразинамида с фильтра 96%. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех
же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное
определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по
предварительно построенному градуировочному графику.
11. Расчет
концентрации
Концентрацию
пиразинамида (С, мг/куб. м) в воздухе вычисляют по формуле:
а х в
С = -----,
б х V
где:
а - содержание
вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику,
мкг;
б - объем пробы, взятой для хроматографирования, куб. см;
в - общий объем
раствора пробы, куб. см;
V - объем воздуха,
отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, куб. дм (см.
Прилож. 1).
12.
Оформление результатов анализа
Результат
количественного анализа представляют в виде (С +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. м, Р = 0,95, где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, ДЕЛЬТА =
0,001 + 0,14С.
13.
Контроль погрешности методики
Значения
характеристики погрешности, норматива оперативного контроля точности и
норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде
зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе
С.
Таблица 2
РЕЗУЛЬТАТЫ
МЕТРОЛОГИЧЕСКОЙ АТТЕСТАЦИИ МЕТОДИКИ
КОЛИЧЕСТВЕННОГО
ХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
|
Диапазон
определяемых
концентраций
пиразинами-
да,
мг/куб. м
|
Наименование метрологической
характеристики
|
|
характеристика
погрешности
ДЕЛЬТА,
мг/куб. м
(Р =
0,95)
|
норматив
опера-
тивного контроля
точности, К,
мг/куб. м
(Р = 0,90, m = 2)
|
норматив
оператив-
ного контроля
воспроизводимости,
D, мг/куб. м
(Р = 0,95, m = 2)
|
|
От
1,5 до 30
|
0,001
+ 0,14С
|
0,003
+ 0,11С
|
0,004
+ 0,08С
|
13.1. Оперативный
контроль воспроизводимости
Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии
с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей
зоны из одного
традиционного места отбора двумя
пробоотборниками
одновременно.
Анализируют в соответствии с
прописью методики,
максимально варьируя условия проведения анализа:
партии реактивов,
набора
мерной посуды и т.д., и получают
два результата С и С
1 2
анализов. Результаты анализа не должны отличаться
друг от друга на
величину
большую, чем норматив
оперативного контроля
воспроизводимости D:
|С - С | <= D.
1 2
При превышении
расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля
воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного
норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и
устраняют их.
13.2. Оперативный
контроль точности
Оперативный контроль точности
выполняют в одной
серии с
анализом
рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей
зоны из одного
традиционного места отбора двумя
пробоотборниками
одновременно.
Затем к одной пробе, отобранной
на фильтр, делают
добавку анализируемого компонента дельта С из раствора, нанося его
на фильтр.
Величина добавки должна соответствовать 50 - 150% от
содержания компонента в пробе. Величина С не должна
выходить за
2
верхнюю
границу диапазона измерения.
Результаты анализа С без
1
добавки и С с добавкой
получают по возможности в
одинаковых
2
условиях: одним
аналитиком, с одной
партией реактивов, одним
набором посуды и т.д.
Погрешность
процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников.
Расчет норматива оперативного контроля погрешности К
проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики
погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают
при выполнении условия:
|С - С - дельта С| <= К.
2 1
14. Нормы
затрат времени на анализ
Для проведения
серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 3
ч.
Методические
указания разработаны Российским государственным медицинским университетом (Е.Б.
Гугля).
Приложение
1
ПРИВЕДЕНИЕ
ОБЪЕМА ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
Приведение объема
воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и
давление 101,33 кПа) проводят по формуле:
V х (273 + 20) х Р
t
V = -------------------,
20 (273 + t) х 101,33
где:
V - объем воздуха, отобранного для анализа,
куб. дм;
t
Р - барометрическое давление,
кПа (101,33 кПа = 760 мм рт.
ст.);
t -
температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
Для удобства
расчета V следует пользоваться таблицей
20
коэффициентов
(Прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным
условиям надо умножить V на соответствующий коэффициент.
t
Приложение
2
КОЭФФИЦИЕНТЫ
ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА ВОЗДУХА
К СТАНДАРТНЫМ
УСЛОВИЯМ
|
Давление Р, кПа/мм рт. ст.
|
|
t °С
|
97,33/
730
|
97,86/
734
|
98,4/
738
|
98,93/
742
|
99,46/
746
|
100/
750
|
100,53/
754
|
101,06/
758
|
101,33/
760
|
101,86/
764
|
|
-30
|
1,1582
|
1,1646
|
1,1709
|
1,1772
|
1,1836
|
1,1899
|
1,1963
|
1,2026
|
1,2058
|
1,2122
|
|
-26
|
1,1393
|
1,1456
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1644
|
1,1705
|
1,1768
|
1,1831
|
1,1862
|
1,1925
|
|
-22
|
1,1212
|
1,1274
|
1,1336
|
1,1396
|
1,1458
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1643
|
1,1673
|
1,1735
|
|
-18
|
1,1036
|
1,1097
|
1,1158
|
1,1218
|
1,1278
|
1,1338
|
1,1399
|
1,1460
|
1,1490
|
1,1551
|
|
-14
|
1,0866
|
1,0926
|
1,0986
|
1,1045
|
1,1105
|
1,1164
|
1,1224
|
1,1284
|
1,1313
|
1,1373
|
|
-10
|
1,0701
|
1,0760
|
1,0819
|
1,0877
|
1,0986
|
1,0994
|
1,1053
|
1,1112
|
1,1141
|
1,1200
|
|
-6
|
1,0540
|
1,0599
|
1,0657
|
1,0714
|
1,0772
|
1,0829
|
1,0887
|
1,0945
|
1,0974
|
1,1032
|
|
-2
|
1,0385
|
1,0442
|
1,0499
|
1,0556
|
1,0613
|
1,0669
|
1,0726
|
1,0784
|
1,0812
|
1,0869
|
|
0
|
1,0309
|
1,0366
|
1,0423
|
1,0477
|
1,0535
|
1,0591
|
1,0648
|
1,0705
|
1,0733
|
1,0789
|
|
+2
|
1,0234
|
1,0291
|
1,0347
|
1,0402
|
1,0459
|
1,0514
|
1,0571
|
1,0627
|
1,0655
|
1,0712
|
|
+6
|
1,0087
|
1,0143
|
1,0198
|
1,0253
|
1,0309
|
1,0363
|
1,0419
|
1,0475
|
1,0502
|
1,0557
|
|
+10
|
0,9944
|
0,9999
|
0,0054
|
1,0108
|
1,0162
|
1,0216
|
1,0272
|
1,0326
|
1,0353
|
1,0407
|
|
+14
|
0,9806
|
0,9860
|
0,9914
|
0,9967
|
1,0027
|
1,0074
|
1,0128
|
1,0183
|
1,0209
|
1,0263
|
|
+18
|
0,9671
|
0,9725
|
0,9778
|
0,9830
|
0,9884
|
0,9936
|
0,9989
|
1,0043
|
1,0069
|
1,0122
|
|
+20
|
0,9605
|
0,9658
|
0,9711
|
0,9783
|
0,9816
|
0,9868
|
0,9921
|
0,9974
|
1,0000
|
1,0053
|
|
+22
|
0,9539
|
0,9592
|
0,9645
|
0,9696
|
0,9749
|
0,9800
|
0,9853
|
0,9906
|
0,9932
|
0,9985
|
|
+24
|
0,9475
|
0,9527
|
0,9579
|
0,9631
|
0,9683
|
0,9735
|
0,9787
|
0,9839
|
0,9865
|
0,9917
|
|
+26
|
0,9412
|
0,9464
|
0,9516
|
0,9566
|
0,9618
|
0,9669
|
0,9721
|
0,9773
|
0,9799
|
0,9851
|
|
+28
|
0,9349
|
0,9401
|
0,9453
|
0,9503
|
0,9555
|
0,9605
|
0,9657
|
0,9708
|
0,9734
|
0,9785
|
|
+30
|
0,9288
|
0,9339
|
0,9391
|
0,9440
|
0,9432
|
0,9542
|
0,9594
|
0,9645
|
0,9670
|
0,9723
|
|
+34
|
0,9167
|
0,9218
|
0,9268
|
0,9318
|
0,9368
|
0,9418
|
0,9468
|
0,9519
|
0,9544
|
0,9595
|
|
+38
|
0,9049
|
0,9099
|
0,9149
|
0,9199
|
0,9248
|
0,9297
|
0,9347
|
0,9397
|
0,9421
|
0,9471
|
Приложение
4
ВЕЩЕСТВА,
ОПРЕДЕЛЯЕМЫЕ ПО РАНЕЕ УТВЕРЖДЕННЫМ
МЕТОДИЧЕСКИМ
УКАЗАНИЯМ
┌───────────────────────┬────────────────────────────────────────┐
│ Название вещества │ Ссылка на
опубликованные методические │
│ │ указания │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│ 1 │ 2 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│1.
N-децил-N,N-диметил-│МУ по фотометрическому
измерению кон- │
│1-деканаминий
хлорид │центраций
диалкилдиметиламмоний хлорида │
│(дидецилдиметиламмоний
│(С - С ) и алкилбензилдиметиламмоний │
│хлорид;
"Арквад │ 17
20
│
│2.10.50") │хлорида (С - С )-ДОН-2, диалкиламино-│
│ │ 10
16 │
│ │пропионитрила
(С - С )-ИФХАН-ГАЗ,
ал- │
│ │ 7 9 │
│ │килтриметиламмоний
хлорида (С - С ), │
│ │ 10 16
│
│ │ДОН-52 в воздухе
рабочей зоны. N утв. │
│ │4905-88, дата
утв. 12.12.88, вып. 25, │
│ │М., 1989, с.
49 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│2.
Поликарбонофторид │МУ на
гравиметрическое определение пыли │
│ │в воздухе рабочей
зоны и в системах │
│ │вентиляционных
установок. МУ N 1719-77, │
│ │дата утв.
18.04.77, вып. 1 - 5, М., │
│ │1981, с. 235 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│3.
Препарат МЭК-Сх-3 │МУ по
фотометрическому измерению массо- │
│ │вых концентраций
эндо-1,3в-ксиланазы │
│ │(ксиланаза) в
воздухе рабочей зоны. │
│ │МУК 4.1.1642-03, дата утв.
29.06.03, │
│ │вып. 42 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│4.
Препарат ПФП-1 │МУ по
спектрофотометрическому измерению │
│ │концентрации амилазы в
воздухе рабочей │
│ │зоны. МУК
4.1.1575-03, дата утв. │
│ │29.06.03, вып.
38 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│5.
Препарат Феркон │МУ по
фотометрическому измерению массо- │
│ │вых концентраций
целловиридина в воздухе│
│ │рабочей зоны. МУК
4.1.1753-03, дата утв.│
│ │29.06.03, вып.
46 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│6.
Селенит натрия │МУ по
атомно-абсорбционному измерению │
│ │массовых
концентраций селена и диоксида │
│ │селена в воздухе
рабочей зоны. │
│ │МУК 4.1.1368-03,
дата утв. 16.05.03, │
│ │вып. 41 │
├───────────────────────┼────────────────────────────────────────┤
│7.
Триамин G-12Д │МУ по
спектрофотометрическому измерению │
│ │концентраций
N',N'-бис-(3-аминопропил)- │
│ │додециламина(лонзабака) в воздухе рабо- │
│ │чей зоны. МУК 4.1.1522-03, дата утв. │
│ │29.06.03, вып. 37 │
└───────────────────────┴────────────────────────────────────────┘